富硒大豆蛋白的酶解及其低聚肽的分离纯化研究.pdfVIP

摘要 硒是人体必须的微量营养元素，大豆低聚肽具有多重生物学功能．将微量元 素硒的研究同大豆低聚肽的研究有效结合起来，开发富硒大豆低聚肽将具有较高 的应用价值。本研究选用湖北恩施高硒区生产的富硒大豆为原料，从富硒大豆中 提取出富硒大豆蛋白，然后用所选的蛋白酶水解富硒大豆蛋白得到酶解产物，再 从酶解产物中分离纯化出高含硒量的富硒大豆低聚肽(分子量1000以下为主)。 主要研究结果如F： 根据富硒大豆蛋白中氨基酸的种类及其含量，参考目前市场上各种蛋白酶的 价格及其来源，查阅相关资料，选定了枯草芽孢杆菌蛋白酶和木瓜蛋白酶刺‘富硒 大豆蛋白进行水解，这两种蛋白酶作用条件相近，且来源广泛、价格也比较便宜， 适用于工业化大生产。 研究了木瓜蛋白酶、枯草芽苞杆菌蛋白酶的酶浓度、温度、DH和底物浓度 对富硒大豆蛋白的水解效率的影响，探讨了水解富硒大豆蛋白的最佳条件。结果 表明：酶浓度、温度、pH和底物浓度对木瓜蛋白酶和枯草芽孢杆菌蛋白酶水解 富硒大豆蛋白的影响程度大小依次为：酶浓度，温度pH底物浓度；木瓜蛋白 酶水解富硒大豆蛋白的最佳条件为：酶浓度15000u／g，温度55。C，pH7．0，底物 浓度2％，时问3h；枯草芽苞杆菌蛋白酶水解富硒大豆蛋白的最佳条件为：酶浓 度8000u／g，温度55℃，pH7．0，底物浓度2％，时间4h。 研究了术瓜蛋白酶和枯草芽孢杆菌蛋白酶混合水解富硒大豆蛋白的最佳条 件，结果表明：这两种酶的添加顺序对富硒大豆蛋白最终的水解度影响不大，混 合酶解的最佳条件为：温度55。C，pH7．0，底物浓度2％，反应前同时加入木瓜 蛋白酶和枯草芽孢杆菌蛋白酶，木瓜蛋白酶的酶浓度为15000u／g，枯草芽孢杆菌 蛋白酶的酶浓度为8000u／g，水解时间为4h，这即是本研究得出的富硒大豆蛋白 酶解的最佳条件。 选定了三种超滤膜埘富硒大豆蛋白酶解混合物进行分离，分别考查了膜通 量、料液原始浓度对超滤的影响、膜两侧平均压力对超滤的影响、膜效能、膜所 受的阻力以及硒的回收率等情况。结果表明：膜通量随时问的延长而降低；料液 试验来说，膜效能随超滤的进行而逐渐降低，且膜效能降低的幅度随超滤膜截留 分子量的减小而增大。膜污染产生的阻力对超滤的阻碍最大，浓差极化边界阻力 对超滤的阻碍电比较大：硒的回收率随所用膜截留分子量的减小而降低。研究得 出富硒大豆低聚肽的最佳超滤分离条件为：先用分子量5000的超滤膜在料液浓 液浓度O-2％、AP=0．32MPa的条件下进行超滤，各分级组分再进行喷雾干燥即 得所要的产品。本研究中富硒大豆蛋白低聚肽的产率仅为55．6％，硒的回收率仅 为52．21％，还有待进一步提高。 试验所得的富硒大豆肽的分子量主要集中在5000以下，在通过分子量1000 超滤膜的富硒大豆低聚肽中，绝大多数的分子量在913．4附近；所得的富硒大豆 低聚肽中含有大冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸、苏氨酸、 丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、异亮 氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、赖氨酸，还有两种氨基酸，即谷氨酰氨和天 冬酰氨通过RT-HPLC没有检出。天冬氨酸，谷氨酸，组氨酸，精氨酸，酪氨酸， 缬氨酸，甲硫氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，赖氨酸等在产品中的相对含量与它们在 原料蛋白中的相对含量相比是降低的；丝氨酸、甘氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨。 酸、半胱氨酸、硒代半胱氨酸、苯丙氨酸、色氨酸等在产品中的相对含量与它们 在原料蛋白中的相对含量相比是升高的，尤其是硒代半胱氨酸，它的相对含量由 在原料蛋白中的O．89％提高到了在富硒大豆低聚肽中的1．57％。 奉研究已经基本确定了富硒大豆低聚肽的制备及其纯化工艺参数，有必要进 行下一步的中试、生产和推广应用。 关键词：大豆硒蛋白；酶解：低聚肽；分离纯化 Abstract Seleniumis a traceelementfurhmnan nessassary has Wecan functions．If bandthe on oligo—peptidemanybiological efficientlystudy seleniumand