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Serine Protease and Its Inhibitor By 第四組 酵素基本反應機制 三個基本動作： 1、 Orientation 空間方向 2、 Acid-base transfer 化學轉移 3、 Bond Strain 構形扭曲 以上三種方式同時發生稱為協同式酵素催化 (concerted set) 例：Carboxypeptidase A ，羧肽酶 若先後依序發生，稱順序式酵素催化 (sequential mechanism) 例：Chymotrypsin ，胰凝乳蛋白酶 Chymotrypsin 胰凝乳蛋白酶 Chymotrypsin 催化步驟大約分成兩段 (1) Acylation (2) Deacylation Acylation 1、Substrate peptide 進入活性區 檢查專一性位置，確定水解位置 (aromatic amino acid) 2、Ser-O- 攻擊 peptide 上面的 carbonyl 碳，形成第一個過渡狀態。 3、Peptide bond 斷裂，His 57 供給氫離 子，放出 free peptide N (N-端那一半) 4、Peptide C 以 acylation 接在 Ser 195 上，成為中間產物 Deacylation 1、水分子進入活性區，結合在 His 57 2、水分子的氧攻擊上述 carbonyl 碳，形成第二個過渡狀態，並把一個氫留在 His57 3、Ser 195 放出所連結的peptide，回復原來的活化狀態 Inhibitor對酵素活性的影響 常見抑制劑： TPCK (tosyl-L-phenylalaninechloromethyl ketone ) DIFP (diisopropyl-fluorophosphate) ※DIFP 會與其上的 Ser 195 反應，然後形成固定的鍵結，使得該酵素失去活性。 Inhibitor - 沙林毒氣 沙林是一種神經毒氣，能使自主神經系統的交感神經與副交感神經立即失去平衡的毒氣。 國考題 62. Chymotrypsin 催化水解蛋白質的胜肽鍵，在催化官能基中，下列何者參與親核性催化機制？ (A) Histidine 57 (B) Aspartate 102 (C) Serine 195 (D) Cysteine 201 78. 79. Chymotrypsinogen如何轉換成Chymotrypsin？ (A) 由protein kinase將Chymotrypsinogen磷酸化 (B) Chymotrypsinogen與cAMP結合 (C) Chymotrypsinogen與鈣離子結合 (D) Chymotrypsinogen經由蛋白水解 (proteolysis) (E) 由原本二聚體(dimer)聚合為四聚体(tetramer) 83. 何者是Chymotrypsin之非可逆性抑制？ (A) p-nitrophenyl acetate (B) Diisopropyl fluorophosphates (C) tosyl-L-lysine chloromethyl ketone (D)EDTA 85. Diisopropylphosphofluoridate (DIPF)為酵素chymotrypsin之抑制劑，是因DIPF與chymotrypsin內核者胺基酸做共價結合？ (A) Asp (B) His (C) Ser (D) Val ※催化鐵三角： His、Asp 、Ser Chymotrypsin 為何是由數條胜肽所組成？ 其實轉譯出來時是一條完整蛋白質，要先經過另一種蛋白脢 trypsin 在 R16-I16 之間切開，才產生活性；另有一裂解處在 Y146-A149，也會使得 chymotrypsin 具有活性。 為何蛋白質被切開後不會散掉？ 因為這些胜肽之間都以雙硫鍵連結著，仍然保持其三級構造以及正確構形。 E5-8 E5-10 Chymotrypsin 活性區上面有三個極為重要的胺基酸，雖然原來在蛋白質長鏈上並沒連在一起 (57, 102, 195)，但經蛋白質摺疊後，卻湊在一起成為一直線。然後發生一件非常重要的事，就是 Asp 102 搶走中間 His 57 的氫，然後 His 57 去搶 Ser 195 的氫，最後 Ser 195 留下一個光禿禿的氧原子，而此氧原子因失去氫而變得極為活躍 (因為有多餘的負電荷)；這就是著名的催化鐵三角 (catalytic triad) 的形成。 E5-11 早期 對