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光电比浊法测定微生物数量
光电比浊法测定微生物数量
一、实验目的及要求
1.了解光电比浊计数法的原理。
2.学习、掌握光电比浊计数法的
操作方法。
二、基本原理
当光线通过微生物菌悬液时,由于菌体的散
射及吸收作用使光线的透过量降低。在一定的范
围内,微生物细胞浓度与透光度成反比,与光密
度成正比,而光密度或透光度可以由光电池精确
测出。
用一系列已知菌数的菌悬液测定光密度,作
出光密度-菌数标准曲线。然后,以样品液所测
得的光密度,从标准曲线中查出对应的菌数。
制作标准曲线时,菌体计数可采用血细胞计
数板计数,平板菌落计数或细胞干重测定等方法。
本实验采用血细胞计数板计数。
三、实验器材
1.菌种:大肠杆菌培养液
2.仪器、材料:722s分光光度计,血细胞计
数板,显微镜,试管,吸水纸,无菌吸管,无菌
生理盐水等。
四、操作步骤
1.标准曲线制作
(1)编号 取无菌试管6支,分别编号为1、2、
3、4、5、6。
(2)调整菌液浓度 用血细胞计数板计数培养
24小时的酿酒酵母菌悬液,并用无菌生理盐水分别
6 6 6
稀释调整为每毫升1×10 、2 ×10 、4 ×10 、
6 6 6
6 ×10 、8 ×10 、10×10 菌量的悬液。分装入编号
的无菌试管中。
(3)测OD值以无菌生理盐水作空白对照,不同
浓度的菌悬液摇匀后于560nm波长测定OD值。
(4)以光密度(OD)值为纵坐标,以每毫升细胞
数为横坐标,绘制标准曲线。
2.样品测定 待测样品用无菌生理盐水适当稀释,
摇匀,560nm波长测定光密度。测定时用无菌生
理盐水作空白对照。
3.根据所测得的光密度值,从标准曲线查得每
毫升的含菌数。
五、实验报告
1.结果
每毫升原液菌数=标准曲线查得每毫升的菌
数×稀释倍数
2.思考题
(1)光电比浊计数的原理是什么?这种计数
法有何优缺点?
(2)光电比浊计数在生产实践中有何应用价
值?
(3)试考虑如何绘制大肠杆菌生长曲线
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