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实验十：分光光度计应用实验（最大吸收波长、标准曲线及未知样浓度的测定） 一、实验目的： 掌握分光光度计的使用方法。 二、实验原理： 1、工作原理 溶液中的物质在光的照射激发下，产生对光吸收的效应，这种吸收是具有选择性的。各种不同的物质都有各自的吸收光谱，因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系，即符合朗伯-比尔定律。 式中 T——透射比 A——吸光度 I0——入射光强度 K——吸收系数 I——透射光强度 C——溶液的浓度 L——溶液的光程长 从以上公式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液的光程长不变时，透过光是根据溶液的浓度而变化的，722型光栅分光光度计的基本原理是根据上述物理光学现象而设计的。 2、仪器的结构 722型光栅分光光度计由光源室，单色器、试样室、光电管暗盒，电子系数及数字显示器等部件组成，其方框图如图6-10所示： 3、仪器的使用 使用仪器前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理。以及各个操作旋钮之功能。如图6-11、图6-12所示。在未接通电源前，应该对仪器的安全性进行检查，电源线接线应牢固。通地要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再接通电源开关。仪器在使用前先检查一下，放大器暗盒的硅胶干燥筒（在仪器的左侧），如受潮变色，应更换干燥的蓝色硅胶或者倒出原硅胶，烘干后再用。 将灵敏度旋钮调置“1”档（放大倍率最小）。 开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波长调至测试用波长。仪器预热20min。 打开试样室盖（光门自动关闭），调节“0”旋钮，使数字显示为“00.0”，盖上试样室盖，将比色皿架置与蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示为“100.0”。 如果显示不到“100.0”，则可适当增加微电流放大器的倍率档数，但尽可能置低倍率档使用，这样仪器将有更高的稳定性。但改变倍率后必须按(4)重新校正“0”和“100%”。 预热后，按(4)连续几次调整“0”和“100%”，仪器即可进行测定工作。 吸光度A的测量按(4)调整仪器的“00.0”和“100%”，将选择开关置于“A”，调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为“0.000”，然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度值。 浓度C的测量：选择开关由“A”旋置“C”，将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测样品放入光路，即可读出被测样品的浓度值。 如果大幅度改变测试波长时，在调整“0”和“100%”后稍等片刻，（因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间），当稳定后，重新调整“0”和“100%”即可工作。 每台仪器所配套的比色皿，不能与其它仪器上的比色皿单个调换。 本仪器数字表后盖，有信号输出0～1000mv，插座1脚为正，2脚为负接地线。 六、注意事项 1、测量完毕，速将暗盒盖打开，关闭电源开关，将灵敏度旋钮调至最低档，取出比色皿，将装有硅胶的干燥剂袋放入暗盒内，关上盖子，将比皿中的溶液倒和烧杯中，用蒸馏水洗净后放回比色皿盒内。 2、每台仪器所配套的比色皿不可与其它仪器上的表面皿单个调换。 图6-9 光吸收示意图 图6-10 仪器结构方框图 1．数字显示器 2．吸光度调零旋钮 3．选择开关 4．吸光度调斜率电位器 5．浓度旋钮 6．光源室 7．电源开关 8．波长手轮 9．波长刻度窗 10．试样架拉手 11．100%T旋钮 12．0%T旋钮 13．灵敏度调节旋钮 14．干燥器 图6-11仪器外形图 1．1.5A保险丝 2．电源插头 3．外接插头 图6-12 仪器后视图