实验十:分光光度计应用实验(最大吸收波长、标准曲线及未知样浓度的 .DOC

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实验十:分光光度计应用实验(最大吸收波长、标准曲线及未知样浓度的

实验十:分光光度计应用实验(最大吸收波长、标准曲线及未知样浓度的测定) 一、实验目的: 掌握分光光度计的使用方法。 二、实验原理: 1、工作原理 溶液中的物质在光的照射激发下,产生对光吸收的效应,这种吸收是具有选择性的。各种不同的物质都有各自的吸收光谱,因此当某单色光通过溶液时,其能量就会被吸收而减弱,光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系,即符合朗伯-比尔定律。 式中 T——透射比 A——吸光度 I0——入射光强度 K——吸收系数 I——透射光强度 C——溶液的浓度 L——溶液的光程长 从以上公式可以看出,当入射光、吸收系数和溶液的光程长不变时,透过光是根据溶液的浓度而变化的,722型光栅分光光度计的基本原理是根据上述物理光学现象而设计的。 2、仪器的结构 722型光栅分光光度计由光源室,单色器、试样室、光电管暗盒,电子系数及数字显示器等部件组成,其方框图如图6-10所示: 3、仪器的使用 使用仪器前,使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理。以及各个操作旋钮之功能。如图6-11、图6-12所示。在未接通电源前,应该对仪器的安全性进行检查,电源线接线应牢固。通地要良好,各个调节旋钮的起始位置应该正确,然后再接通电源开关。仪器在使用前先检查一下,放大器暗盒的硅胶干燥筒(在仪器的左侧),如受潮变色,应更换干燥的蓝色硅胶或者倒出原硅胶,烘干后再用。 将灵敏度旋钮调置“1”档(放大倍率最小)。 开启电源,指示灯亮,选择开关置于“T”,波长调至测试用波长。仪器预热20min。 打开试样室盖(光门自动关闭),调节“0”旋钮,使数字显示为“00.0”,盖上试样室盖,将比色皿架置与蒸馏水校正位置,使光电管受光,调节透过率“100%”旋钮,使数字显示为“100.0”。 如果显示不到“100.0”,则可适当增加微电流放大器的倍率档数,但尽可能置低倍率档使用,这样仪器将有更高的稳定性。但改变倍率后必须按(4)重新校正“0”和“100%”。 预热后,按(4)连续几次调整“0”和“100%”,仪器即可进行测定工作。 吸光度A的测量按(4)调整仪器的“00.0”和“100%”,将选择开关置于“A”,调节吸光度调零旋钮,使得数字显示为“0.000”,然后将被测样品移入光路,显示值即为被测样品的吸光度值。 浓度C的测量:选择开关由“A”旋置“C”,将已标定浓度的样品放入光路,调节浓度旋钮,使得数字显示为标定值,将被测样品放入光路,即可读出被测样品的浓度值。 如果大幅度改变测试波长时,在调整“0”和“100%”后稍等片刻,(因光能量变化急剧,光电管受光后响应缓慢,需一段光响应平衡时间),当稳定后,重新调整“0”和“100%”即可工作。 每台仪器所配套的比色皿,不能与其它仪器上的比色皿单个调换。 本仪器数字表后盖,有信号输出0~1000mv,插座1脚为正,2脚为负接地线。 六、注意事项 1、测量完毕,速将暗盒盖打开,关闭电源开关,将灵敏度旋钮调至最低档,取出比色皿,将装有硅胶的干燥剂袋放入暗盒内,关上盖子,将比皿中的溶液倒和烧杯中,用蒸馏水洗净后放回比色皿盒内。 2、每台仪器所配套的比色皿不可与其它仪器上的表面皿单个调换。 图6-9 光吸收示意图 图6-10 仪器结构方框图 1.数字显示器 2.吸光度调零旋钮 3.选择开关 4.吸光度调斜率电位器 5.浓度旋钮 6.光源室 7.电源开关 8.波长手轮 9.波长刻度窗 10.试样架拉手 11.100%T旋钮 12.0%T旋钮 13.灵敏度调节旋钮 14.干燥器 图6-11仪器外形图 1.1.5A保险丝 2.电源插头 3.外接插头 图6-12 仪器后视图

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