酶催化化学反应的能力底物.pptVIP

第六章 诊断酶学第一节 概述第二节 酶促反应动力学第三节 血清酶第四节 酶活性浓度的测定技术第五节 酶的免疫化学测定第六节 同工酶及其亚型测定第七节 临床常用血清酶、同工酶及其 亚型分析 * * 诊 断 酶 学 赵敏 　　第一节　概　述 一、酶的组成、结构和功能 1、酶的本质和特性 本质：蛋白质（绝大部分）或核酸（极少数） 特性：极高的催化效率、高度的特异性、催化 　　　的可调节性。 　 常用术语 酶促反应： 由酶所催化的反应 酶活性： 酶催化化学反应的能力 底物： 酶催化所作用的物质 产物： 酶促反应的生成物 酶的特异性：酶对作用物的选择性 激活剂： 加速酶促反应的物质 抑制剂： 减慢甚至终止酶促反应的物质 2、酶的结构与功能 单纯酶：由约100～10000个氨基酸肽键相连而成 酶 结合酶 蛋白质——酶蛋白 辅酶 非蛋白部分——辅因子 辅基 2、酶的结构与功能 酶是蛋白质，具有一、二、三、四级结构 单体酶：只由一条多肽链构成的酶 寡聚酶：由多个相同或不同亚基以非共价键连接的酶 多酶体系：在细胞内存在着许多由几种不同功能的酶 彼此聚合而成的多酶复合物 酶的活性中心 酶的必需基团在一级结构上可能相距很远，但在空间结构上彼此靠近，组成具有能与底物结合并起催化反应的特定空间结构区域，称为酶的活性中心。 对结合酶来说，辅酶或辅基参与酶活性中心的组成。 二、酶的催化作用机制 1、活化能 2、酶降低活化能的作用机制 酶通过与底物形成一种或多种中间复合物来降低反应的活化能 三、酶的命名、分类与编号 第二节 酶促反应动力学 一、酶促反应 K1 K2 E + S ES E + P K-1 酶 底物 酶-底物复合物 酶 产物 Vmax［S］ VO = Km +［S］ 米-曼氏方程 最大反应速率 底物浓度 米氏常数 反应速度 （一）Km 　　若v=0.5Vmax，则Km=[S]，可见Km值等于酶促反应的初速率为最大速率Vmax一半时的底物浓度。Km值一般在10-6～10-2mol／L之间。Km只与酶的性质有关，而与酶的浓度无关。 　　　Vmax［S］ VO = 　Km +［S］ 　　　　Km 意义： 　　　 　　　 　　　　Km是酶的特征性常数之一，在临床酶学分析中具有重要意义。 1．1／Km可近似地表示酶对底物的亲和力的大小，Km值越小，表示酶与底物的亲和力越大，反之亦然。 2．如果一个酶有几种底物，则对每一种底物各有一个特定的Km值，其中Km值最小的底物大都是该酶的最适底物或天然底物。 　　　Vmax［S］ VO = 　Km +［S］ 3．如已知酶的Km，可计算某一底物浓度时反应速率v和最大速率Vmax的比值，并可推知酶的活性中心被底物饱和的分数。同样，如要求v和Vmax有一定的百分比，也可算出所需底物浓度为其Km的多少倍。 4．利用工具酶来测定体液中某一成分的浓度或某一酶的催化活性浓度时，可根据米-曼氏方程或其衍变方程式来计算工具酶的用量。 5．测定Km值可鉴别不同来源但催化相同反应的酶是同一种酶或是同工酶。 　　　Vmax［S］ VO = 　Km +［S］ 6．如一个酶催化正逆两个方向，测定正逆两个方向底物的Km及底物浓度，可大体推测该酶在体内催化反应的方向及其催化效率。 7．在代谢酶系中，当一组酶催化连续的代谢反应时，如已知各酶的Km及其相应底物的浓度，有助于寻找代谢的限速步骤。一般Km值最大的酶所催化的反应为该酶系的限速步骤。 　　　Vmax［S］ VO = 　Km +［S］ 　　　　　(二)Vmax 　　 Vmax表示在一定酶量下的最大反应速率，即酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度 呈正比。在酶的浓度不变时，对于特定底物而言，Vmax也是一个常数。 (三)Km和Vmax的测定 　 将米－曼氏方程进行倒数处理，而转换成直线方程为：