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9人类性染色质小体的制备与观察

实验十 人类性染色质小体 的制备与观察;掌握莱昂假说和X染色体剂量补偿的含义。 掌握观察与鉴别X染色质的简易方法,识别其形态特征及所在部位,为进一步研究人体染色体的畸变与疾病提供参考依据。;实验原理; 研究发现,间期核内X染色质的数目总是比X染色体的数目少1。 进一步研究表明: X染色质是一条异染色质化(兼性异染色质)的X染色体,在间期复制要比其他的染色体晚。 ;莱昂假说(1961年,Mary Lyon ) 雌性哺乳动物体细胞内仅有一条X染色体是有活性的。另一条X染色体在遗传上是失活的,在间期细胞核中螺旋化而呈异固缩的X染色质。 X染色体的失活是随机的,也是恒定的。 X染色体失活发生在胚胎早期(妊娠第16天)。在此以前的所有细胞中的X染色体都是有活性的。;人类在受精后的第16天(受精卵分裂到5000-6000),植入子宫壁时发生lyon化。;剂量补偿: 由于雌性细胞中的两个X染色体中的一个发生异固缩(也称Lyon化),失去活性,这样保证了雌雄两性细胞中都只有一条X染色体保持转录活性,使两性X连锁基因产物的量保持在相同水平上。这种效应称为X染色体的剂量补偿。;证据1;克隆培养时,每个克隆只出现一条电泳带;证据2—玳瑁猫;Y染色质;口腔颊部粘膜上皮细胞 毛囊细胞 60%冰醋酸 45%冰醋酸 卡宝品红 75%乙醇;1.口腔颊部粘膜上皮细胞巴氏小体观察 刮取颊部粘膜上皮细胞(用灭菌玻璃片)→涂片(两片45°角)→60%冰醋酸固定5min→吸去冰醋酸,卡宝品红染色10min→盖片→镜检;2.发根毛囊细胞巴氏小体观察 拔取带毛囊头发一段→ →→45%冰醋酸解离5min→ →剥取毛囊→ →卡宝品红染色10min→ → →压片观察 ;注意事项;分别观察男女各50个可数细胞,计算显示X染色质所占百分比。 观察中选绘1-2个典型细胞,标明X染色质的形状和部位。 ;可数细胞的标准:核质染色呈网状或颗粒状;核膜清晰,无缺损;染色适度,周围无杂质。 ;X染色质;男女个体细胞中的巴氏小体;;正常女性(46,XX)的口腔粘膜细胞中,X染色质约15%左右,平均16.4%,一般不超过30~35%,仅含1个X染色质。 男性只有0~3%,平均0.7%。 ;思考问题;Xg血型???统

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