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蛋白提取常见问题分析 Q ：如何进行组织液氮研磨？ A ：将组织块在液氮里冻实，敲成大小合适的小块后放在研钵里，倒液氮，边研边加，保持 研钵里有液氮，或是保持组织块不融。研碎了就行了。注意做前研钵等器具要预冷，用液氮 或是先放负二十冰箱一段时间。 注意事项：1.液氮研磨的研钵，药勺必须预冷。2.开始研磨前，将研钵置于冰袋上，并加入 少量的液氮，快速将样品转入其中。3.继续加入液氮，快速捣碎样品，然后快速研磨。4.待 液氮挥发完前，继续加入液氮，快速淹没，重复操作，待样品变成非常细小的白色干粉时即 可。5.将干粉刮下转入裂解液中，再加裂解液于研钵中，将其中的黏附的样品洗下。整个过 程保持样品处于温度低的环境，研磨的速度要快而有力度。这样才能破碎细胞，同时不降解 蛋白。 Q ：提取蛋白Western 内参如何选择？ A ：参照下表选择： 适用范围 内参名称 分子量大小 注意事项 胞浆蛋白和 beta-actin 43 kDa 不适用于骨骼肌样品，细胞 总蛋白 生长条件的改变和细胞外 基质成分的相互作用可能 会改变肌动蛋白的合成 胞浆蛋白和 GAPDH 30-40 kDa 一些生理因素例如缺氧症 总蛋白 和糖尿病会增强 GAPDH 在 特定细胞中的表达 胞浆蛋白和 Tubulin 微管蛋白 55 kDa 微管蛋白的表达随着抗菌 总蛋白 和抗有丝分裂抗性药物而 改变 核蛋白 TBP （TATA box binding protein ） 38 kDa 不适用于除去 DNA 的样本 Lamin A 核蛋白 74 kDa 核蛋白 Lamin B 核纤层蛋白 72 kDa 不适用于除去核膜的样本 核蛋白 Histon H3 膜蛋白 α-Tubulin 55 kDa 膜蛋白 Na-K ATPase 植物内参 Rubisco 核酮糖二磷酸羧化酶 Lhcb4 多抗 当实