诊断酶学.pptVIP

诊断酶学 东区检验科 马 明 酶学概述 酶的概念、结构及功能基本概念  （一）诊断酶学的发展简史 20世纪初临床就开始测定体液中的酶 1908年测尿AMY活力——诊断急性胰腺炎 30年代ALP用于诊断骨骼疾病 诊断酶学的真正发展从50年代用分光光度法建立了连续监测酶活性方法开始 70年代开始起，逐步将注意力集中到同工酶测定上，又随免疫学和技术方法的开展，用抗原抗体反应有可能直接测定微量的酶蛋白。 （二）广泛利用酶诊断的原因 1. 测定酶活力的方法灵敏度、准确性较好； 2. 酶活力的变化早于临床体征或其他诊断指标 （三）诊断酶学的作用： 各种疾病的诊断、预后和随访观察 （一）血清（浆）特异酶：在血清（浆）中发挥催化作用的酶类，有明确的生理功能，含量高于其他组织。 （二）非特异的血浆酶：在血中不起任何生理作用，浓度明显低于组织和细胞中含量。 Ⅰ. 外分泌酶：血清中来源于外分泌腺的酶。 Ⅱ.细胞酶：存在于机体各种组织细胞中进行物质代谢的酶类。 三、血清酶变化的病理生理机制 （一）细胞酶的释放 Ⅰ. 细胞内外酶浓度的差异 Ⅱ.酶在细胞内定位与存在形式 Ⅲ.酶蛋白分子量的大小 （二）酶在细胞外间隙的分布和运送 细胞中的酶经过三种途径进入血液： 直接进入血液； 既和组织间隙也和血液直接相接触； 大部分进入组织液，经淋巴系统入血。 （三）血中酶的清除 一般以血中酶的半寿期代表酶从血中清除快慢。 表7-2　血浆中酶的半寿期 酶 半寿期 AST 17±5h ALT 47±10h GLD 18±1h LD1　 113±60h LD5　 10±2h CK 约15h CK-MM 17±4h Ck-MB 12±4h CK-BB 约5h ALP 3-7天 GGT 3-4天 CHE 约10天 AMY 3-6h （四）酶合成异常 对于血浆特异酶，细胞内酶合成下降是引起血中酶变化的重要因素。 （五）其它 抑制剂和活化剂 四、血清酶的生理变异 （一）性别 （二）年龄 （三）进食 （四）运动 （五）妊娠与分娩 五、酶活性测定方法和质量测定方法及其评价 酶活性浓度的测定 （一）酶活性浓度测定方法 酶活性浓度测定就是要使酶促反应的初速度（v）达到最大速度Vmax，即在过量底物存在下的零级反应期的速度，此时反应速度与酶浓度[E]之间存在线性关系。 按照酶促反应时间的不同可将酶活性浓度测定方法分为两大类: 定时法（fixed time assay） 连续监测法（continuous monitoring assay）。 按检测方法分类： 分光光度法、旋光法、荧光法、电化学法、化学反应法、核素测定法、量热法 1.定时法（固定时间法） 定时法：测定酶与底物作用反应一定时间后底物或产物变化的总量，计算酶促反应平均速度。 优点：比较简单，最后测定时因酶促反应已被终止，故所用仪器无需恒温装置，显色剂的选择也可不考虑对酶活性的影响。 缺点：无法知道在整个酶促反应进程中是否都处于线性期。 利用该法测定酶活性浓度，必须保证酶和底物在所选定的温度下作用时间要非常精确，否则会引起较大误差。。 2、连续监测法（动力学法或速率法） 指在酶促反应过程中用仪器监测某一反应产物或底物的浓度随时间的变化量，求出酶反应初速度，间接计算酶活性浓度的方法。 优点：无须终止酶促反应，不需添加其它成色试剂，就能将反应物变化的多点测定结果连接成线，观察到整个反应过程，选择线性反应期来计算酶活性，结果准确可靠。 要求检测仪器具有恒温装置及自动检测功能，自动生化分析仪都能达到这些要求。