电镜显微分析——汇总版.pptVIP

原子力显微镜Atomic Force Microscopy;*;*;*;*;*;;*;;这里，常常使用PI反馈（proportional-intergeral feedback）控制成像过程。 P：proportional，比例的意思，在PI中称为P gain(比例增益)。 I：intergeral，积分的意思。在PI中称为I gain(积分增益)。 设定点（setpoint）与实际值之间的差值被用来作为改变微悬臂高度的依据。积分增益控制所用到的时间值和比例增益所用到的比例值决定了如何更新高度的位置。 这两个值控制了系统以多快的速度对样品的高度变化做出反应。扫图时需自行优化这两个参数。;*;接触模式（contact mode) 非接触模式（non-contact mode) 轻敲模式( tapping mode）; 针尖始终向样品接触并简单地在表面上移动，针尖—样品间的相互作用力是互相接触原子间存在的库仑排斥力，其大小通常为10－8 —10－11N。; 优点：可产生稳定、高分辨图像。 缺点： 可能使样品产生相当大的变形，对柔软的样品造成破坏，以及破坏探针，严重影响AFM成像质量。 适用于表面平整样品的表征。; 相互作用力是范德华吸引力，远小于排斥力. ;优点：对样品无损伤 缺点： 1）分辨率要比接触式的低。 2）气体的表面压吸附到样品表面，造成图像 数据不稳定和对样品的破坏。; 介于接触模式和非接触模式之间: 其特点是扫描过程中微悬臂也是振荡的并具有比非接触模式更大的振幅(5—100nm)，针尖在振荡时间断地与样品接触。;优点： 1）分辨率几乎同接触模式一样好；具有与非接触模式对针尖与样品无损无污染的优点，特别适合生物大分子和细胞样品的成像。 2）接触非常短暂，因此剪切力引起的对样品的破坏几乎完全消失； 缺点：由于共振频率可能会受液体环境波动影响，该模式的液下成像对系统配置要求较高。;三种工作模式的比较;*;*;*;*;力检测部分;压电扫描系统 ;*;力检测部分;力检测部分;力检测部分; 对针尖性能的要求;*;*;*;控制系统主要有两个功能： (1)提供控制压电转换器X-Y方向扫描的驱动电压； (2)在恒力模式下维持来自显微镜检测环路输入模拟信号在一恒定数值．计算机通过设定值与实际测量值之差, 控制系统不断地输出相应电压来调节Z方向压电传感器的伸缩，从而维持环路的输出电压恒定。 ;计算机控制系统;力检测部分;AFM操作;4.进针。接触式模式调好SUM值后按 图标自动进针，间接接触模式下要手动设定压力和振幅后自动进针； 5.力测定时首先要进行探针弹性系数校正，然后测力； 6.进行图样叠加要进行光学影像校正，先使探针进针然后抬起一次再进行校正，可以手动也可以自动校正； 7.通过光学图像将探针移动到感兴趣的位置自动下针后开始测量，测量过程中时刻注意Oseilloscope，调整相应参数使Oseilloscope中两条曲线重合的最好； 8.测试完毕保存测得的数据，可以手动保存液可以设置为自动保存； 9.退出操作系统。取出探针，样品（如使用了Biocell应洗净吹干），依次关闭显微镜控制器，计算机控制器，稳压电源。;AFM head——最重要的部分;*; AFM受工作环境限制较少，它可以在超高真空、气相、液相和电化学的环境下操作。尤其是可在液体中成像，为在近生理条件下研究生物大分子的结构和相互作用提供了有效的研究手段。 (1)真空环境：真空AFM避免了大气中杂质和水膜的干扰，但其操作较复杂。 (2)气相环境：在气相环境中，AFM操作比较容易，它是广泛采用的一种工作环境。它可以在空气中研究任何固体表面，气相环境中AFM多受样品表面水膜干扰。 (3)液相环境：液相中AFM消除了针尖和样品之间的毛细现象，因此减少了针尖对样品的总作用力。液相AFM的应用十分广阔，它包括生物体系、腐蚀或任一液固界面的研究。;*;*; 1. 粉末样品的制备 粉末样品的制备常用的是胶纸法，先把两面胶纸粘贴在样品座上，然后把粉末撒到胶纸上，吹去未粘贴在胶纸上的多余粉末即可。 2. 块状样品的制备 玻璃、陶瓷及晶体等固体样品需要抛光，注意固体样品表面的粗糙度。; 3. 生物组织样品和生物大分子如DNA类样品，蛋白质等样品的制备 生物组织样品：选取组织表面较为平整的部位，剪成15 ×15 cm小块，观测面朝上，展平后贴在盖玻片上；滴加固定液于样品表面上，静置 30 min 左右；用超纯水冲洗去固定液中的溶质所形成的结晶；将盖玻片置于AFM的扫描器上，进