第四章细胞工程制药.ppt

第四章 细胞工程制药 细胞工程药物 第一节、动物细胞工程制药基本技术及实例 第二节、植物细胞工程制药基本技术及实例 细胞工程 指以细胞为研究对象，运用细胞生物学、分子生物学等学科的原理和方法，按照人们的意志设计、改造细胞的某些遗传性状，从而培育出新的生物改良品种或通过细胞培养获得自然界难以获得的珍贵产品的新兴生物技术。 微生物、动物、植物细胞培养特性 动物细胞工程药物 适合真核表达的的药物蛋白或亚单位疫苗 单克隆抗体 植物细胞工程药物 次生代谢产物（天然产物） 萜类 黄酮类 生物碱 第一节、动物细胞工程制药基本技术 一、动物细胞培养技术：概述、仪器设备、培养基、培养方法、种质保存、大规模培养技术 二、动物细胞 融合技术及单克隆抗体制备（略） 三、转基因动物技术（略） 四、核移植及动物克隆技术（略） 五、干细胞技术（略） 动物细胞方法 （一）组织块培养法 （二）细胞单层培养法 （三）单细胞微量板克隆技术 动物细胞培养概述 动物细胞与组织培养是从动物体内取出细胞或者组织，模拟体内的生理环境，在无菌、适温和丰富的营养条件下，使离体细胞或者组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术。 培养细胞的特性 悬浮型—血液、淋巴细胞、杂交瘤细胞 贴壁型： [A]上皮细胞型 [B]成纤维细胞型 [C]游走细胞型 [D]多形细胞形 （1）动物细胞贴壁生长特性 （2）动物细胞接触抑制特性 兼性贴壁型： 动物培养细胞的优点 （1） 细胞经培养后形成的细胞系和细胞株，特征均一。 （2） 理化环境可控制，培养物可直接被观测。 （3） 提供大量均一的细胞供制备用。 （4） 便于进行人工筛选。 （5） 结合显微电影技术，可观察细胞代谢活动和反应。 应用： （1）生产有重要价值的蛋白质产品 分泌性的蛋白质产品 （2）培养皮肤细胞用于移植 形成组织 （3）检测有毒物质 致癌致畸引起染色体数目和结构改变 （4）理论研究 培养正常或异常细胞用于生理、病理、药理研究 （1）动物细胞贴壁生长特性 （2）动物细胞接触抑制特性 细胞从接种到长满底物表面后，由于细胞繁殖数量增多相互接触后，不再增加。 动物细胞培养所需仪器设备 实验室要求 （A）和缓冲间相连，缓冲间内备消毒服装和鞋，口罩等，入内换上。 （B）室内空气不流通，有适当的光线，清洁，干燥.万级。 （C）侧部可设传递窗，用于物品传递。 （D）有消毒用紫外线灯 （1）培养器具 （2）超净工作台 （3）CO2培养箱 （4）倒置显微镜 （5）纯化水装置 （1）培养器具 （2）超净工作台 超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。 100级超净工作台指标：（≥0.5цm≤3.5粒/L） （3） CO2培养箱 CO2培养箱设定的条件为37 ℃ ，5％CO2 。 二氧化碳的作用：细胞生长需要、维持pH值。 （4）倒置显微镜 （5）纯化水装置 动物细胞的培养基 动物细胞的培养基组成----氨基酸、葡萄糖、蛋白质、核酸类物质、维生素、辅酶、激素、生长因子、微量元素、缓冲系统。 1、培养细胞的生存环境和培养液要求 2、天然培养基 3、合成培养基 4、无血清培养基 1、培养细胞的生存环境 适宜的温度----人和哺乳动物培养细胞最适温度均为35－37℃。 气体环境和氢离子浓度----需要一定量的O2和CO2（95％空气+5%CO2）；pH7.2-7.4 营养物质----适当的培养基 环境无毒和无菌：双抗、消毒 渗透压： 培养液要求 氨基酸---氮源 盐类---钠离子，钾离子，镁离子，钙离子，氯离子，硫酸根离子，磷酸根离子，碳酸氢根离子等 葡萄糖：供能 缓冲系统---CO2缓冲系统或HEPES （羟乙基哌嗪乙硫磺酸 ） 生长因子---PDGF，EGF，FGF等 其它成分---维生素，矿物，有机补充物，激素等 平衡盐溶液（BSS） 功效： ①维持渗透压 ②提供缓冲系统 ③提供水分和无机盐 4、天然培养基 天然培养基如----血清，血浆，组织浸出液等 优点----营养成分丰富，培养效果好 缺点----来源受限。成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。易发生支原体污染 天然培养基的类型： [A]乳蛋白水解物培养基 [B]酪蛋白水解物培养基 [C]血清及胚胎浸出液培养基 5、合成培养基 合成培养基--是根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。如TC199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。 优点--标准化生