实验十六血清胆固醇的定量测定醋酸酐法.docVIP

实验十六 血清胆固醇的定量测定（醋酸酐法） 一 实验目的 了解并掌握胆固醇定量测定的醋酸酐法。 二 实验原理 血清意胆固醇测定对高脂血症的诊断、冠心病和动脉粥样硬化和防治均有意义。血清总胆固醇升高常见原发性高胆固醇血症、肾病综合症、甲状腺机能减退、糖尿病等疾病。 胆固醇的测定临床常用的比色法有两类： 固醇化的氯仿式醋酸溶液中加入醋酸酐-硫酸试剂，产生蓝绿色。 固醇的醋酸、乙醇式异丙醇溶液中加入高铁-硫酸试剂产生紫红色。 由于胆固醇颜色反应特异性差，直接测定往往受血液中其倔因素干扰，所以精细的方法是先经抽提，分离及纯化等步骤，然后显色定量。 本实验采用醋酐-硫酸单一试剂显色法。本法测定100ml血清总胆固醇的正常值为125~200mg。 醋酐能使胆固醇脱水，再与硫酸结合生成绿色化合物。 三 实验器材 血清。 2、试管1.5cm×15cm(×3)。 3、吸管0.10ml(×3)、5.0ml(×1)。 4、容量瓶100ml(×1)。 5、烧杯100ml（×2）。 6、电子分析天平。 7、722型（或7220型）分光光度计。 四 实验试剂 固醇标准液（2mg/ml）： 准确称取干燥胆固醇200mg，先用少量无水乙醇溶液，完全转移到100ml容量瓶中，再用无水乙醇稀释至刻度。 硫脲显色剂； 称取硫脲0.5g，溶解于350ml冰醋酸及650ml醋酐配制而成的混合物中，此溶液放置冰箱内可长期保存。 使用液系于上述每100ml硫脲溶液中逐滴加入浓硫酸10ml，边加边摇，不便溶液过热。冷却后放置冰箱中，可保存半个月以上。溶液发黄后不能再用。 五 实验方法 取干燥试管3支，分别标明“空白管”、“测定管”及“标准管”，按表9进行操作。 表9 醋酸酐定量测定胆固醇化——操作表 试剂 试管 空白管 标准管 测定管 胆固醇标准液/ml 血清液/ml 硫脲显色剂/ml — — 4．0 0.1 — 4.0 — 0.1 4.0 快速加入显色剂，立即混匀，于37℃水浴中保温10min，取出后，立即以显色剂作为空白调零点，在620nm波长处进行比色。 六 计算 式中 m：100ml血清中胆固醇的质量（mg ）； A1：样品液的吸光度； A0：标准液的吸光度； C0：标准液胆固醇的质量浓度，即2mg/ml； 100：100ml血清。 七 注意事项 在显色后不宜曝于强光下，因强光可便溶液褪色而影响测定结果。所用各种反应试剂及玻璃器皿均须于燥无水。 八 思考题 血清胆固醇醋酸酐测定的原理？