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第３８卷 第１期 Ｖｏｌ. ３８，Ｎｏ. １ ２０１７ 年２ 月 低温保存对Ｈｅｐ-Ｇ２细胞凋亡的影响 Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２０１７ 文章编号：０２５３－４３３９（２０１７）０１－０１１３－０６ ｄｏｉ：１０.３９６９／ ｊ.ｉｓｓｎ.０２５３－４３３９.２０１７.０１.１１３ 低温保存对Ｈｅｐ⁃Ｇ２ 细胞凋亡的影响 梁 玮 姚 岚 刘宝林 （上海理工大学生物系统热科学研究所 上海 ２０００９３） 摘 要 样本质量是体现生物样本库价值的关键，但是低温保存可能导致细胞凋亡及基因表达量的变化，影响样本质量。 本文 采用流式细胞术与实时荧光定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）的方法，研究了Ｈｅｐ-Ｇ２细胞在不同条件下冻存后凋亡及相关基因表达量。 结果表 明：低温保存影响Ｈｅｐ-Ｇ２细胞的成活率、凋亡情况及某些凋亡基因表达量。 无论冻存过程中是否添加低温保护剂，低温保存都 会对细胞的凋亡相关基因表达带来不同程度的影响。 不添加保护剂冻存会导致细胞死亡，添加 １０％ ＤＭＳＯ冻存会导致细胞凋 亡，复苏培养２４ ｈ后细胞的成活率、凋亡情况与相关基因表达量基本与对照组水平一致。 关键词 低温保存；细胞凋亡；流式细胞术；实时荧光定量ＰＣＲ ＋ 中图分类号：ＴＢ６１ １；Ｒ３１８.５２；Ｒ７３-３ 文献标识码：Ａ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｎ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ Ｈｅｐ⁃Ｇ２ Ｃｅｌｌｓ Ｌｉａｎｇ Ｗｅｉ Ｙａｏ Ｌａｎ Ｌｉｕ Ｂａｏｌｉｎ （Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｔｈｅｒｍａｌ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｈａｎｇｈａｉ ｆｏｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， Ｓｈａｎｇｈａｉ，２０００９３， Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｂｉｏｓｐｅｃｉｍｅｎｓ ｉｓ ａ ｖｅｒｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆａｃｔｏｒ ｏｆ ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ａ ｂｉｏｂａｎｋ. Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｍａｙ ｉｎｄｕｃｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｃｅｌｌｓ. Ｉｎｔｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｐｒｏｆｉｌｅｓｗｅｒｅａｓｓｅｓｓｅｄｂｙｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ ＲＮＡｓｒｅ- ｌａｔｅｄ ｔｏ ａｐｏｐｔｏｓｉｓｗｅｒｅ ｅｓｔｉｍａｔｅｄ ｂｙ ｒｅａｌ-ｔｉｍｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ （ｑＰＣＲ） ｉｎ Ｈｅｐ-Ｇ２ ｃｅｌｌｓ ａｆｔｅｒ ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ. Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔｗｉｔｈｔｈｅａｄｄｉｔｉｏｎｏｆ １０％ ＤＭＳＯｏｒｎｏｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔｄｕｒｉｎｇｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ｔｈｅｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｐｒｏｇｒｅｓｓｍａｄｅｓｏｍｅｉｍｐａｃｔ ｏｎ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＮＡｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ Ｈｅｐ-Ｇ２ ｃｅｌｌｓ. Ｄｕｒｉｎｇ ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ａｌｌ ｄｅａｄ ｗｉｔｈ ｎｏ ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ，ｂｕｔ ｍｏｒｅ ｃｅｌｌｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｃｃｕｒｒｅｄｗｉｔｈ １０％ ＤＭＳＯ. Ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｒｅｃｏｖｅｒｅｄｔｏ ｎｏｒｍａｌ ｌｅｖｅｌ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓｗｅｒｅ ｒｅ- ｃｕｌｔｕｒｅｄｆｏｒ２４ ｈｏｕｒｓ ａｆｔｅｒ ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ. Ｋｅｙｗｏｒｄｓ ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ；ｒｅａｌ-ｔｉｍｅｆｌｕｏｒ