杜氏盐藻核基质附着区的分离及特征性分析 - 广西植物.PDF

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杜氏盐藻核基质附着区的分离及特征性分析 - 广西植物

维普资讯 广 西 植 物 Guihaia 25(2):145— 148 2005年 3月 杜氏盐藻核基质附着区的分离及特征性分析 王天云 ,袁保梅 ,柴玉荣 ,王建人 ,薛乐勋 (1.郑州大学细胞生物学研究室 ,河南郑州 450052;2.河南中医学院生理教研室 ,河南郑州 450053) 摘 要 :采用 0.5 TritonX一100破碎细胞 ,15 Percol1分离盐藻细胞核 ,25mM二碘水杨酸锂(1ithiumdi— iodosalicylate,LIS)抽提核蛋 白,限制酶消化除去结合松弛的DNA,蛋 白酶 K—SDS处理,酚 氯仿抽提,乙醇沉 淀提取核基质附着DNA,限制酶酶切连至pUC18载体上构建MARs文库。随机挑选 6个克隆进行体外结合 实验筛选,筛选出一能与核基质结合的克隆,测序分析结果表明该序列具明显的MAR序列特征。 关键词:盐藻;核基质附着区;核基质;基因沉默 中图分类号:Q943.2 文献标识码:A 文章编号:1000—3142(2005)02—0145-04 Isolationandcharacterizati0nofmatrix attachmentregion from Dunaliellasalina WANG Tian—yun1,YUAN Bao—mei,CHAIYu—rong , WANGJian—ren2.XueLe—xun1 (1.LaboratoryforCellBiology,ZhengzhouUniversity,Zhengzhou450052,China;2.Department ofPhysiology,HenanCollegeofTraditionalChineseMediczne.Zhengzhou450003.ChiHa) Abstract:TheDunaliellasalina celIsweredisruptedwith0.5 TritonX 100,purifiedby 15 Percol1.Nu— clearproteinswereremovedusing25mM lithium diiodosalicylate.Afterthenuclearmatricesdigestedwithre strictionenzyme,thematrixattachedDNAsweretreatedwithproteinaseK andSDS,extractedbyphenol,chlor— oform andethanC precipitated,subsequentlycutwithrestrictionenzymeandligatedtOthepUC18,transformedinto E.coliJM109andsixcolonieswerepickedrandomlyandscreenedthroughinvitrobindingassay.OneDNA frag— mentscouldspecificallybindtOthenuclearmatrixandthesequencehadthefeaturesofMAR typically. Keywords:Dunaliellasalina;matrixattachmentregion;nuclearmatrix;genesilencing 核基质结合 区 (Matrixattachmentregion, 重要的作用 (Vain等,1999)。外源基因在宿主中表 MAR)又称核骨架附着 区(scaffoldattachmentre— 达受到抑制的现象称之为转基因沉默(transgenesi— gion,SAR)是染色质被限制酶消化后仍与核基质或 lencing)。其作用机制主要有 3种:位置效应的基因 核骨架结合的DNA序列 (Cockerill等,1986),长度 沉默、转录水平的基

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