双水相萃取.pptxVIP

双水相萃取; 很多生物产品无法使用有机溶剂萃取的方法进行分离纯化。 蛋白质一般亲水性强，不溶于有机溶剂； 蛋白质在有机溶剂相中易变形失活。 (溶剂萃取法新技术之一） （ATPE:Two-aqueous phase extraction);;内容提纲： 1.双水相体系 2.双水相萃取的基本原理 3.影响双水相分配的主要因素 4.双水相萃取技术的发展 5.双水相萃取操作及应用;1.双水相体系;（2）双水相体系形成的原因： 聚合物的不相溶性（空间位阻） 聚合物的不相溶性：各个聚合物分子，都倾向于在其周围有形状、大小和极性相同的分子，同时，由于不同类型分子间的斥力大于同它们的亲水性有关的相互吸引力，因此聚合物发生分离，形成两个不同的相。 对于某些聚合物溶液与一些无机盐溶液相混时，只要浓度达到一定范围时，体系形成双水相的机理尚不清楚。;聚合物溶液的混合 混合过程熵的增加：两种物质混合时，熵的增加与涉及的分子数目有关。 分子间相互作用力(能)：主要表现为分子中各个集团间的相互作用力，随着分子量的增加，分子间各个集团数目相应增加，其相互作用力也增大。 当分子间相互作用力与熵的增加相比占主导地位时，就会分层。 一般认为，只要两聚合物水溶液的憎水程度有所差异，混合时就会发生相分离。;（3）双水相体系的相图： 双节线；A-体系总组成；B、C-节点；B(A)C-系线;系线的长度；K-临界点； 在同一系线上的不同点，总组成不同，而上下两相组成相同，只是体积VT、VB不同，但它们均服从杠杆原理。 ;（4）双水相体系的种类： 高聚物-高聚物双水相(如PEG-Dextran)：易于与后续处理连接，如直接上离子交换柱而不必脱盐。 高聚物-盐双水相(如PEG- / ):盐浓度高，蛋白质易盐析，废水处理困难。 非离子表面活性剂水胶团双相体系(如Triton-114表面活性剂)：相成分简单，易于回收，应用还不多。 阴阳离子表面活性剂双水相体系（如SDS-CATB） 醇-盐双水相体系(如乙醇/丙醇-无机盐-水); 常见的双水相系统 ;（5）双水相体系萃取的特点： ①易于工业放大； ②纯化倍数高(2-20倍)，目标产物有较高的收率(80%)； ③易于实现连续化操作，设备简单； ④不易引起生物活性物质失活(含水量高达75%-90%)； ⑤操作条件温和（常温常压）； ⑥不存在有机溶剂残留问题，而且操作环境对人体无害（高聚物一般为不挥发性物质）； ⑦成本较高（聚合物价格昂贵，难以回收）。 ;2.双水相萃取的基本原理;大量研究表明：生物分子的分配系数取决于溶质与双水相系统间的各种相互作用，主要有静电作用、疏水作用和亲和作用等，其分配系数可为各种相互作用之和。 ①静电作用：两相系统中若有带电溶质存在，会对大分子在两相间的分配系数产生影响。（图5-15） Donnan Potential:当大分子或粒子带有静电荷时，在带有电荷分配不相等时，就会在两相间产生电位差，称为道南电位。 ②疏水作用：某些大分子物质表面具有疏水区，溶质的表面疏水性会对其在两相间的分配系数产生影响。;3.影响双水相分配的主要因素;（1）高聚物的相对分子质量： 在高聚物浓度保持不变的前提下，降低该高聚物的相对分子质量，被分配的可溶性生物大分子如蛋白质或核酸，或颗粒如细胞或细胞碎片和细胞器，将更多地分配于该相。 以PEG-Dextran体系为例，↓Dextran→K↓ ↓PEG→K↑（表5-4） 这种影响与蛋白质相对分子质量也存在关系，相对分子质量越大，影响也随之增大。 （2）高聚物的浓度： 成相物质的总浓度越高，蛋白质越容易分配于其中的某一相；而对于细胞等颗粒来说，在临界点附近细胞大多分配于其中的某一相。 ;（3）盐的种类和浓度： 盐的种类和浓度对分配系数的影响，主要反映在相间电位和蛋白质的疏水性差异上，这是由于当双水相系统中存在这些电解质时，达到平衡时，各项均需保持电中性的原则。 （4）PH的影响： 双水相系统的PH值能影响蛋白质上可解离集团的离解度，使蛋白质表面电荷改变，影响其分配系数；另外，PH值也会影响盐的解离（ ）。 （5）操作温度： 温度影响双水相系统的相图，继而影响蛋白质的分配系数，在临界点附近尤为显著。;一般采用室温操作： ?成相系统聚合物PEG对蛋白质有稳定作用，常温下蛋白质不会发生变性； ?常温下溶液粘度较低， 容易相分离； ?常温操作节省冷却费用。 ;4.双水相萃取技术的发展; 20世纪80年代以来，越