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第9章 吸光光度法Spectrophotometry [教学目的] 了解光的基本性质和吸收光谱的产生，掌握光吸收基本定律和及分光光度计的组成及工作原理，学习并掌握吸光光度法及其方法应用。 [教学重点与难点] 光吸收基本定律。 第9章 吸光光度法Spectrophotometry 10.1 概述 10.2 光度分析法的设计 10.3 光度分析法的误差 10.4 其他吸光光度法及光度分析法的应用 9.1 概述 9.1.1 吸光光度法的特点 吸光光度法是基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法，包括比色法、可见及紫外吸光光度法及红外光谱法等。我们重点讨论可见光区的吸光光度法。 1.光的基本性质 2. 吸收光谱产生的原理 吸收光谱分为：原子吸收光谱和分子吸收光谱。是因物质对不同波长的光具有选择性吸收作用而产生的。 （1）原子吸收光谱 Atomic absorption spectrum 由原子外层电子选择性地吸收某些波长的电磁波而引起的，为线状光谱。 线状光谱 - Line spectrum （2）分子吸收光谱 -带状光谱 molecular absorption spectrum 由电子能级跃迁而产生吸收光谱[能量差1~20(eV)]，是紫外及可见分光光度法。 UV/Vis Spectrophotometry 由分子振动能级(能量差约0.05~l eV)和转动能级(能量差小于0.05 eV)的跃迁而产生的吸收光谱，为红外吸收光谱。用于分子结构的研究。 Infrared Spectrophotometry 带状光谱 Band spectrum * 单色光（monochromatic light）：具同一波长的光。 * 复合光（multiplex light）：由不同波长组成的光。 * 紫外光（ultraviolet light）：波长200~400 nm。 * 可见光（visible light）：人眼能感觉到的光，波长在400~750 nm。它是由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等各种色光按一定比例混合而成的 * 波段（wave band）：各种色光的波长范围不同。 * 互补色光（complementary color light）：按一定比例混合，得到白光（white light）。 * 物质的颜色是因物质对不同波长的光具有选择性吸收作用而产生的。 * 吸收光谱曲线或光吸收曲线（ absorption curve）：以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图。 * 最大吸收波长（maximum absorption wavelengh ）：光吸收程度最大处的波长，用λmax表示 * 吸光度（absorbance） 在可见光，KMnO4溶液 对波长525 nm附近绿色光的 吸收最强，而对紫色和红色 的吸收很弱。λmax=525 nm。 浓度不同时，光吸收曲线形 状相同， λmax不变，吸光 度不同。 3.目视比色法(colorimetry)和吸光光度法的特点 （1）灵敏度高。常用于测定试样中质量分数为1%~10-5的微量组分，甚至可测定低至质量分数为10-6~10-8的痕量组分。 （2）准确度较高。 目视比色法的相对误差为5%~10%，吸光光度法为2%~5%。 （3）应用广泛。几乎所有的无机离子和许多有机化合物都可以直接或间接地用目视比色法或吸光光度法进行测定。 （4）仪器简单、操作简便、快速。 9.1.2 光吸收的基本定律 1. 朗伯-比尔定律 （Lambert-Beer law） 当一束平行单色光通过任何均匀、非散射的固体、液体或气体介质时，一部分被吸收，一部分透过介质，一部分被器皿的表面反射。如图6-3所示，设人射光强度为I0，吸收光强度为Ia，透过光强度为It，反射光强度为Ir。 在吸光光度分析法中，试液和空白溶液分别置于同样质料及厚度的吸收池中，然后让强度为I‘0的单色光分别通过这两个吸收池，再测量其透过光的强度。此时反射光强度基本上是不变的，且其影响可以相互抵消。 （2）朗伯-比尔定律 朗伯(Lambert J H)和比尔(Beer A)分别于1760和1852年研究了光的吸收与溶液层的厚度及溶液浓度的定量关系，二者结合称为朗伯-比尔定律，也称为光的吸收定律。 当一束强度为I0的平行单色光垂直照射到长度为b的液层、浓度为c的溶液时，由于溶