大鼠急性脊髓损伤组织中蛋白激酶c活性的表达.pdfVIP

(二)主要试剂 1．EGTA、EDTA 2．[r一32P]ATP 3．鱼精蛋白 4．小鼠抗大鼠PKC抗体 5．SABC试剂盒 (三)主要仪器 1．改良Allen’s打击器(自制) 2．匀浆机 3．高速低温离心机 4．蛋白定量仪 5．液体闪烁仪 二、实验方法 (一)动物模型制备 参照改良的Allen’s重物打击法制备大鼠脊髓背侧损伤模 型：损伤部位为Tl。节段，致伤力为509cmf，对照组仅行全椎板切 除，不损伤脊髓。 (二)取材、石蜡切片制备及组织染色 各组动物分别于伤后3h、6h、12h、24h、72h再次麻醉，以损伤 区为中心取约1．0em脊髓组织并切成两部分，一部分冻存备用， 另一部分制成蜡块，石蜡切片机连续切片，分别行尼氏染色及免疫 组化染色。 (三)PKC活性测定 在4℃下进行100mg冻存脊髓组织胞浆及胞膜蛋白提取后采 用Folin一酚试剂法进行蛋白定量。并参考Takai法进行各样品 PKC活性测定，PKC活性用放射比活性表示。 (四)统计学分析 应用计算机SPSS