快速反向点杂交hpv基因分型——方法建立及其与宫颈病变关系的研究.pdfVIP

丛墨垦塑生翌窒!!!茎旦坌型二互堡堡：!丝苎皇童塑塑奎茎墨塑堕些 cp8304型)，应用DNA杂交仪建立一种快速反向点杂交(ReverseDotBlot，RDB) HPV基因分型方法，并对该系统进行评价。同时利用该方法检测珠三角地区临床标 本，分析珠三角地区21型常见HPV基因型分布情况，探讨不同基因型与宫颈病变的 临床关系。 方法 ～ ～～ 收集广东省人民医院妇产科门诊病例355例，按薄层液基细胞学检测结果 (Bethesda System 根据2I型序列比对结果设计HPV21种亚型的特异性探针，其中包括15种常见高危 型和5种低危型及cp8304型，同时设计了内参基因Glohin探针，探针均用氨基标 记；对临床标本进行PCR扩增和快速反向点杂交分型检测。经过对临床标本的筛选， 制各HPV不同型别阳性标准模板。应用DNA杂交仪进行杂交，并分别对探针浓度、 杂交温度、杂交时间三个条件进行优化，建立快速反向点杂交HPV基因分型方法； 同时利用FDA认证的杂交捕获II代方法对临床标本进行HPV检测，比较两种方法检 测结果，对快速反向点杂交分型方法进行系统评价。此外，利用快速反向点杂交对 珠三角地区临床标本进行2l常见HPV基因分型，了解珠三角地区HPV基因型分布情 况。 结果 一、快速反向点杂交HPV基因分型方法的建立及评价 1．成功建立快速反向点杂交对HPV基因分型 提取标本DNA质量完好，21型HPV基因型阳性模板重组质粒经测序证实。系统最佳 l，杂交温度945。C．杂交时间为10i钟。2l型临床 条件为：探针浓度为15pmol／u 标本经快速反向点杂交检测分型，蓝色斑点清晰可见，各型别间无非特异显色；快 速反向点杂交检NHPV基因型最低限度为102．104copies。 2．基因分型结果 通过快速反向点杂交进行基因分型，355例宫颈刷标本中共检测出阳性标本2“ 68)以及3种低危型(6、11、42)。另有两例PCR扩增电泳结果呈阳性，分型无结果， II 堡望垦塑皇垄奎!!：蔓璺坌里二查婆婆塞丝苎兰童塑塑茎茎至塑婴塑 经克隆测序鉴定后分别为73型和54型。 3．杂交捕获1I代(hybrid 果比较 355例标本中，杂交捕获II代方法和快速反向点杂交分别检测出222例和2ll例阳 96．2％(128／133)。两种方法比较X谴0．72，取得了较好的一致性。 二、珠三角地区HPV型别分布以及各基因型与不同宫颈病变关系 1．珠三角地区2l型常见HPV基因型分布 利用快速反向点杂交分型方法对1085例标本进行HPV基因分型，共检测出437例 HPV感染病例，总阳性率为40．3％，其中单型感染有319例(73．0％)：混合感染有 2．生殖道HPV感染基因亚型分布与不同宫颈病变的关系 355例病例中不同宫颈病变HPV感染率有所不同，X2为50．56，PO．05显示不 快速反向点杂交和HCII方法检出HPV感染率分别为43．3％／46．4％、50．0％／50％、 的感染率也随之增高。宫颈病变程度不同HPV感染的基因型也存在差异。各疾病组 50％。 结论 L本研究成功建立了一种快速简便的反向点杂交HPV基因分型方法，并与杂交捕获 II代基因分型方法进行比较，两法取得了较好的一致性。 3％、6．9％。 HPV31；各型的感染率分别是24．5％、16．2％、16．0％、7 Il 快速反向点杂交HPV基因分型一方法建证及H与富颈摘变关系的ii：lf宄 3．不同宫颈病变中，HPV感染率与型别分布均不同。良性宫颈病变ASC—H、ASCUS LSIL组中感染率分别为50．0％、74．1％、808％；恶性HSIL组中感染率为91．7％： 随着宫颈病变程度增加HPV感染率明显升高。宫颈病变程度不同，HPV感染的基因 型别也存在差异。 关键词：人乳头瘤病毒， 基因分型， 反向点杂交， 杂交捕获II代 快速反向点杂交咿v基因分型一方法建立及其与宫颈病变关系的研究 HPV Rever