异黄酮类植物雌激素对大鼠成骨细胞生物活性影响的实验研究.pdfVIP

中文摘要 中都有发现。研究发现，它们在结构上与天然雌激素相似， 具有弱雌激素样作用，但在副作用方而植物雌激素远较雌激 素为轻。 国内外已有关于天然异黄酮对骨代谢的影响在分子、细 胞、实验动物和临床应用方面的研究。但相关研究基本都停 留在总黄酮水平。对于异黄酮类单体成分研究很少。因此， 我们选定异黄酮类植物雌激素的两种单体成分——葛根素 和大豆苷元进行研究，对异黄酮类植物雌激素在骨代谢中的 作用机理进行一定的探索。 成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合 成、分泌和矿化。成骨细胞可以分泌多种蛋白，包括碱性磷 酸酶(alkalinephosphatase，ALP)、骨钙素(bone 丫．carboxyglutamic morphogeneticprotein，BMP)等。骨特异性碱性磷酸酶来源于 成骨细胞膜，它在骨骼中主要集中在骨化部位，其作用是分 解有机磷酸化合物，产生无机磷酸盐离子，使它与钙离子结 合形成羟磷灰石而沉积于骨组织。研究证实骨碱性磷酸酶与 骨矿化率有很好的相关性，是反映骨合成的敏感指标。骨钙 素是在成骨及牙组织中发现的一种非胶原蛋白，是成骨细胞 分化的特征性表现。目前认为血清中骨钙素几乎全部是有成 骨细胞合成。其主要功能是维持骨的正常矿化速率，抑制生 长软骨矿化的速度，促进骨组织矿物质沉积的正常钙化过 程。骨形态发生蛋白是目前公认的高效骨诱导因子，广泛存 在于人和动物的骨组织中。它是由人和动物的成骨细胞产生 的，具有诱导成骨细胞分化和诱导体外成骨能力。 中文摘要 本实验采用大鼠成骨细胞体外培养的方法、分子生物学 等实验技术，在细胞和分子水平上研究异黄酮类植物雌激素 葛根素和大豆苷元对大鼠成骨细胞增殖、分化及蛋白表达的 影响，来探讨异黄酮类植物雌激素在骨代谢中的作用机理， 以期为骨质疏松防治药物的研究开阔思路。 方法： 1采用改良的组织块法分离培养新生(24h)SD大鼠颅骨成骨 O撂mol／L～1 细胞。将不同浓度的葛根素(1 O～mol／L)及大豆 中，利用倒置相差显微镜观察细胞形态和数量的改变。 h、48 h和72h葛根素及大豆 2采用噻唑兰(MTT)法考察了24 苷元对成骨细胞增殖的影响。 3采用对硝基苯二钠基质动力学法检测了48h和72h成骨细 胞内碱性磷酸酶活性的改变。 h和72h细胞骨钙素的含 4采用放射免疫法(RJA)测定了48 旦 里o i h和72h细胞骨形态发生蛋白的 5采用RT-PCR方法检测了48 表达。 结果： 1大豆苷元 1．1细胞形态学观察：培养3～5d，细胞为长梭形、条索状， 融合成片，分界较为模糊。大豆苷元处理组与对照组相比， 细胞更加密集，细胞间隙少，形态无明显差异。 1．2对大鼠成骨细胞增殖的影响：大鼠成骨细胞在含有不同 浓度大豆苷元的培养基中培养24h，各浓度均无促增殖作用， l×1 O。9mQl／L却有抑制增殖作用；培养48h及72h，各浓度均 中文摘要 有显著的促增殖作用(PO．05)； 1．3对大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响：培养48h，与对 照组比较，大豆苷元无明显的促进碱性磷酸酶活性的作用； 培养72h，只有l×1O’1mol／L和1×lO～m01／L浓度有促进碱性 磷酸酶活性的作用。 1．4对大鼠成骨细胞骨钙素的影响：与对照组相比，大豆苷 元处理组在48h及72h均表现出明显的促进成骨细胞分泌骨 O。7mol／L、1×1O诺mol／L。 钙素的作用，有效浓度为1×1 2葛根素 2．1细胞形态学观察 培养3≈5d，细胞为长梭形、