抑制核因子κb对缺血再灌注大鼠心肌保护作用的研究.pdfVIP

豺jl{i}与方法 Dawley) 1．缺血再灌注动物模型制备：健康雄性SD(Sprague 射寒赫，气管播警连接动物入王呼吸橇频率55一∞次·分～，潮 气量30一40fnl·kg。)。监测标准肢体Ⅱ导联心电嬲。去除左侧 第4肋暴露心脏，以动脉圆锥和左心耳交界处的左冠状静脉主干 为标悫，用4-0凭摸伤缝针予左心耳掇部下方2ram处遴针，穿避 心飘裘层在肺动脉圆锥旁磁针，结扎左籁状动脉，lh后松开结扎 线进行6h再灌注。以心电图S—T段明显上抬，结扎线以下心肌 颜色变暗，松开结扎线后S—T段下降犬于1／2为模型成功的标 ．L J￡》o 2．实验分组：将40只犬鼠随机分成4组，每组lO只。①对照 组(control group，cc)：左冠状动脉穿线厝不结扎，出尾静脉注射 group，L／R)：左籁状动脉穿线后由尾静脉注射生理盐水10IIlI· kg～，稳定10rain后行缺血再灌注处理。(签)PDTC组(pDTC group， 液缰(Danshen Injection group，DI)：尾静脉注射丹参注射液109· kg～，余同I／R组。 3．指标检测：实验终点摘取心脏，除去血管、脂肪、右心室。鳃 左心塞心勰分戎嚣份，一份鼷予键律玺浆，另一份麓10％荦醛隧 定以备病理及免疲组化检测。①心肌匀浆SOD、MDA、MPO：左心 室心肌剪碎后制成10％匀浆液，取上清液用硫代巴此妥酸法测定 MAD含量，黄漂呤氧纯骜法溅定SOD透链，酶法测定MPO溪彀， 双缩脲法测定匀浆蛋白质含擞。②病理学观察：石蜡切片趣染 色后观察心肌组织病理性改变。③免疫组化染色分析：NF一 ·2· 缀辱l：染色。以正常兔IsG我替～摭掾对照。染色续聚粼定：NF— KB p65活化表现胞浆、胞核黄染，ICAM—l、TGF[3。以胞浆黄染为 阳性，选取细胞分布均匀的5个高倍(400×)橇瓣俸为溪察区，计 数5个视野内细胞数积NF—I(Bp65阳性细胞数，计算阳性纲胞 率。多媒体病理图像分析系统测定ICAM一1、％耶，警均积分光 蜜霞。 4．统计学分析：计量数据用均数士标准差(曼土s)裘示，使用 SPS$10．0软件迸行缴汁学分析。多缀滗较用方差分掇，两缀间疣 较用配对t检验，率麴检验用x2检验。PO．05为显著性标准。 实验缩暴 1．心肌MDA、SOD、MPO变化：I／R缄心肌匀浆MDA含璧、 搬称比较秃嚣著性差异，p稳Q。05。 2．心肌癍理学改变：I／R各组心肌排列豢乱，部分区域心肌 细胞浊肿，横纹不清或消失，核凝解或消失，缺血中心送宥炎穗细 胞没润；丹参注射浚朔PDTC组也鸯心觏缨照变性与坏死改变，但 程度较轻，心肌坏瓤范围较小，坏死周边炎性缎胞漫澜蛾显减少。 3。心醌NF一翘麟、ICAM—l、、稻郑l检测：VR缓心魏孛 NF—KB p65豳性细胞率与ICAbl一1积分光镣度较cG组照著增 参注射泼缀，NF—KB p65与ICAM—l表达求平较VR组骥显降 低，pO。0l，颟’rGF显著增加，PO。0l。 ·3· 讨 论 心飘缺矗再灌注蹙典型的氧化应激过程，隧对也是炎症反应 的过程。NF—KB是心肌缺血再灌注早期激活的转录因子之一， 在心肌L／R后缺血缺氧、氧自由基、脂质过氧化物、TNF一0【、IL—l 等裁激下，NF—KB放激活逶速转髓至缨燕核，启动多种基因懿表 重心肌炎瘫反应、损伤、凋亡和坏死。 抑制，MDA生成减少，SOD活力增加，提示脂旗过氧亿减轻，心肌 抗氧化能力提高。同时MPO和ICAM一1水平下降，-IB砩|表达增 加，提示中性粒缨胞牯捌誊浸澜减较，内皮保护作用增强，心肌损害 减轻。说骥抑制NF—KB激活黯IJR心艉英蠢傈护作用。 丹参滋射液是中药丹参的提取物，在心肌