抑癌基因p16在宫颈鳞状上皮细胞癌中的作用及其机制.pdfVIP

抑癌基因p16在宫颈鳞状上皮细胞癌中的作用及其机制 2003级研究生：邓飞导师：胡新荣 广东医学院病理教研室，广东湛江524023 摘要 【目的】宫颈癌是妇科常见肿瘤之一，细胞周期失调被认为在宫颈瘸的形 成过程中发挥了重要作用。p16是一种抑癌基因。p16蛋白在细胞周期中通过抑 制CDK4／6与cyclinD的结合而起着负调控的作用。研究表明宫颈癌细胞中的p16 表达异常，但文献报道的结果并不一致，且其在宫颈癌发生过程中的作用也不清 楚。因此，本实验的目的是观察并进一步明确p16在宫颈浸润癌及其前期病变中 的表达状况和趋势，探讨其在宫颈癌早期诊断中的应用价值，研究高表达的p16 在宫颈鳞状上皮细胞癌中所起的作用，探讨p16在宫颈鳞状细胞上皮癌中高表达 的机制，为p16在宫颈癌生物选择性治疗中的应用提供依据。 【方法】采用sP免疫组化法检测来自石蜡切片、冰冻切片、和细胞涂片 的宫颈标本的p16表达情况。石蜡标本包括宫颈炎19例，低度上皮内瘤变 (Cervical IntraepithelialNeoplasia,CIN 癌旁CINl6例，浸润癌66例。新鲜冰冻标本包括宫颈炎10例，浸润癌20例。 涂片标本包括5例宫颈细胞涂片。按细胞着色情况将浸润癌中阳性病例分为p16 低表达组、p16高表达组。用sP免疫组化法分别检测两组中总体pRb(包括未 磷酸化、低磷酸化、高磷酸化)的表达情况，及代表pRb磷酸化水平的bcl．2、 p73的表达情况：根据冰冻切片免疫组化着色情况，选取p16低表达、高表达病 例，用western．blot检测新鲜组织中p16总蛋白表达量，免疫共沉淀方法检测组 低表达，p16高表达病例中p16与CDK4的结合率，并比较p16功能的改变。作 为研究p16高表达机制的对照，用sP免疫组化检测5例视网膜母细胞瘤10例 乳腺癌及癌旁正常组织石蜡切片中p16的表达情况。随机抽取27例宫颈石蜡标 本，用显微切割的方法切取宫颈石蜡切片中的病变组织，用PCR方法检测其中 高危型HPV的感染情况。 【结果】免疫组化结果：按上述病例标本顺序(依次是富颈炎、低度CIN、 高度CIN、癌旁CIN、浸润癌)，石蜡标本中p16表达阳性率分别是0(0／19)， 阳性表达率与浸润癌组的p16表达率差别无显著性外(f检验，P0．05)，其余 各组的p16表达率均与浸润癌组的p16表达率的差异均有统计学意义(f检验， P0．05)；冰冻切片中宫颈慢性炎组的p16表达阳性率为0(0／10)明显低于浸润 证实均有核异型细胞。各例中异型细胞p16免疫细胞化学染色均阳性。宫颈癌 (矛检验，P0．05)：免疫共沉淀结果显示，宫颈癌中p16与CDK4结合。通过 pRb在5例视网膜母细胞瘤中皆无表达，乳腺癌p16阳性率为50％(5／10)，癌 HPV检测及分型结果：随机抽取的宫颈石蜡切片中均有高危型HPV(HPvl6、 18)感染。 【结论】(1)p16在宫颈浸润癌及其前期病变细胞中表达增高。(2)由 于p16免疫组化染色阳性不出现在宫颈正常上皮细胞，仅出现在上皮内瘤变和浸 润癌细胞中，且宫颈涂片的核异型细胞均呈阳性表达，提示p16免疫组化染色可 作为一个宫颈癌及其前期病变的辅助病理诊断标记。(3)高表达的p16在宫颈 癌中仍能与eyclinD竞争结合CDK4，且高表达致其总体功能增强。(4)宫颈癌 中p16表达增高没有降低pRb的磷酸化水平，没有抑制E2F的释放，没有发挥 抑癌基因的作用，也不影响Rb蛋白的表达。但是为什么有功能的p16却未能阻 止pRb的磷酸化，其原因和机制还需要进一步的研究。(5)高危型HPV感染 及其导致的Rb蛋白的失活，是p16在宫颈癌中高表达的可能重要原因之一。 【关键词】抑癌基因；p16；宫颈癌；宫颈上皮内瘤变(C1N)；CDK4；pRb bcl-2；p73；HPV 2 of Rolesandmechanismtumor gene suppressor