碱性成纤维细胞生长因子对不同日龄大鼠癫疒间持续状态后海马神经发生的影响论文.docVIP

　　碱性成纤维细胞生长因子对不同日龄大鼠癫疒间持续状态后海马神经发生的影响论文 戴园园 袁宝强 魏海燕 【摘要】 目的 了解不同年龄大鼠癫疒间持续状态后外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对海马齿状回颗粒细胞层神经发生的影响。方法 建立14天大鼠和60天大鼠戊四氮(PTZ)诱导癫疒间持续状态模型,生理盐水（NS）注射作为对照，皮下注射bFGF进行干预，分4组：NS组、NS+ bFGF组 、PTZ组、PTZ+ bFGF组。采用Brdu标记新生细胞，免疫组化方法检测造模后大鼠海马齿状回神经发生情况，造模后第7、14天2个时间点观察海马齿状回Brdu阳性细胞数。结果 造模后第7天和14天,PTZ组中各日龄组大鼠海马齿状回Brdu阳性细胞数明显高于各自对应的NS组(P 0.01),NS+bFGF组各日龄大鼠Brdu阳性细胞数亦高于NS组(P 0.05), PTZ+bFGF组Brdu免疫阳性细胞数较PTZ组亦有升高(14天日龄组P 0.05,60天日龄组P 0.01)。60天大鼠较14天大鼠升高幅度更为明显(P 0.01)。结论 bFGF可增加癫疒间持续状态大鼠海马齿状回颗粒细胞发生,对60日龄大鼠比14日龄幼鼠更为明显。 【关键词】 癫疒间持续状态 碱性成纤维细胞生长因子 神经发生 齿状回 Abstract: Objective To study the neurogenesis of hippocampal dentate gyrus granular cell layer in different-age rats status epilepticus model on 14-day and 60-day old rats. The experiment ent. Brdu labeled neent, Brdu positive cells in the dentate gyrus ore numerous in the PTZ group and the NS+bFGF group than in the NS group, more numerous in the PTZ+bFGF group than in the PTZ group (P 0.01, P 0.05）. The increment ore marked in the 60-day-old rats than in the 14-day-olds. Conclusion Basic fibroblast groote neurogenesis in the hippocampus dentate gyrus granular cell layer in rats ore marked in the elder rats than in the younger. Key a公司) 80 mg/kg,.freela公司）20 μg/kg （用生理盐水稀释成1 mg/L）。PTZ组和PTZ+bFGF组中除去无发作和死亡者，每组入组6只。 参照Racine癫疒间发作分级标准［3］:0级,无任何发作;1级,口、面部抽搐;2级,节律性点头样运动;3级,前肢阵挛;4级,前肢阵挛伴后肢站立;5级,反复的4级发作或抽搐致死。PTZ组和PTZ+ bFGF组入组大鼠均达到3~5级发作，持续30 min以上，发作间期意识无清醒，呈癫疒间持续状态。发作1 h以上者给予地西泮4 mg/kg腹腔注射中止发作。 1.3 Brdu注射 Brdu（Sigma公司）溶于生理盐水，浓度10 g/L。注射戊四氮或生理盐水后第6、13天各组经腹腔注射Brdu，剂量为50 mg/kg,每2 h 1次，共4次。 1.4 组织切片制备 各组分别于注射Brdu后24 h腹腔注射10％水合氯醛（0.35 ml/kg）麻醉。生理盐水快速灌注后，含4％多聚甲醛的PBS先快速灌注再缓慢灌注，直到大鼠肝脏变白、尾变硬,停止灌注。开颅,取嗅脑至中脑之间的脑组织,放入4%多聚甲醛固定12 h以上,然后依次移入20%和30%蔗糖中4℃过夜至沉底。在海马部位做冠状冰冻切片,每隔2张取1张切片,每例标本(双侧海马结构)取切片不少于8张,进行免疫组化染色。 1.5 Brdu免疫组化 应用SP免疫组化试剂盒（北京中杉金桥生物公司）, 按以下步骤处理:脑片入新配制的0.1%H2O2溶液中室温下孵育30 min以灭活内源性过氧化物酶; 入2 mol/L HCl溶液中，37℃ 浸泡60 min使DNA变性，再用0.1 mol/L硼酸缓冲液(pH 8.5)室温下浸泡10 min用以中和盐酸；然后以鼠抗尿嘧啶脱氧核苷单克隆抗体（1∶100，北京中杉金桥生物公司）作为一抗， 采用SP法行Brdu免疫组织化学染