糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化逆转可能性的研究论文.docVIP

　　糖尿病肾病大鼠肾脏纤维化逆转可能性的研究论文 方开云 娄晶磊 肖瑛 石明隽 桂华珍 郭兵 张国忠 【摘要】 目的 动态观察α平滑肌肌动蛋白（αSMA）和E钙黏素（Ecadherin）在糖尿病（DM）大鼠肾组织中的表达，探讨糖尿病肾病（DN）大鼠肾脏纤维化逆转的可能性。方法 选择SD大鼠随机分为正常对照组、DM组和胰岛素治疗组，链脲佐菌素（STZ）诱发大鼠DM。正常对照组和DM组按病程分为2、4、8、12、16、20和24 RNA水平。结果 DM组大鼠血糖、24 h尿蛋白、Scr、RI均较正常对照组明显升高（P＜0.05,P＜0.01），胰岛素治疗组上述指标均较DM组显著降低（P＜0.05,P＜0.01）。正常大鼠αSMA只在血管壁表达，DM组2 RNA表达水平较正常对照组显著增多（P＜0.01），胰岛素治疗组则显著低于DM组（P＜0.01）；DM组Ecadherin蛋白的表达水平较正常对照组显著降低（P＜0.01），而胰岛素治疗组显著高于DM组（P＜0.01）。结论 控制血糖可使DN大鼠肾脏一定程度的纤维化逆转，其机制可能与肾脏固有细胞表型转变被抑制或反转有关。 【关键词】 α平滑肌肌动蛋白；E钙黏素；糖尿病肾病；大鼠 【Abstract】 Objective To dynamic observe the expressions of αsmooth muscle actin (aSMA) and Ecadherin to investigate the possibility of renal fibrosis reverse in diabetic nephropathy rats. Methods Streptozotocininduced diabetic rats ly divided into 2，4，8，12，16，20，24 ent groups.The treatment groups al level beginning from the 13 th al control groups atching points respectively. Blood glucose, 24 h urine protein, serum creatinine (Scr), renal index（RI）of rats easured. PAS staining munohistochemical staining, A, Ecadherin and fibronectin (FN). Results pared arkably in diabetic rats (P＜0.05, P＜0.01). In diabetic rats,.freelesangial cells and tubule stainings of αSMA RNA echanism may involve in blocking or reversing the phenotypic transition of renal resident cells. 【Key a），兔抗大鼠Ecadherin、FN多克隆抗体、小鼠抗大鼠αSMA和βactin单克隆抗体、羊抗兔或小鼠IgGHRP（Santa Cruz）、SABC试剂盒、DAB显色试剂盒、ECM试剂盒（武汉博士德）；EZ Spin Column RNA Purification Kit（BBI），RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit（Fermentas），Taq酶（TaKaRa），αSMA、FN和βactin引物合成（上海生工）。 1.3 实验方法 1.3.1 动物模型及分组 大鼠随机分成正常对照组、DM组和胰岛素治疗组。正常对照组和DM组又分为2、4、8、12、16、20和24 g/kg，72 h后测血糖，血糖≥16.7 mmol/L者入选。正常对照组注射同体积的STZ溶媒。胰岛素治疗组从第13周开始皮下注射精蛋白锌胰岛素，实行个体化剂量，以血糖控制在4～7 mmol/L,尿糖阴性为准分为16、20和24 厚的石蜡切片，行PAS染色，光镜观察肾组织形态结构变化。以肾重（mg）与体重（g）比值作为肾脏指数（RI）。 1.3.4 免疫组化 石蜡切片脱蜡水化，经微波热修复抗原及5%BSA封闭后，分别加入αSMA（1∶200）和FN抗体（1∶100），4℃孵育过夜。加入生物素化二抗，室温下孵育30 min；滴加SABC试剂；DAB显色。PBS代替一抗，作阴性对照。双盲观察染色切片，每张切片随机取10个不重复高倍(400倍)视野,计数细胞的阳性染色，取均值表示αSMA的表达。FN的表达程度则参考郭