红景天苷的提取分离、生物合成与生物活性研究进展论文.docVIP

　　红景天苷的提取分离、生物合成与生物活性研究进展论文 魏平平，张莉，袁堃，石峰，齐刚 【摘要】 红景天苷是红景天的主要有效成分，药理学研究证明其具有免疫调节、抗衰老、神经细胞保护、肝脏保护、心血管保护、抗氧化、肿瘤抑制、双向调节及影响物质代谢等多种作用。红景天是一种珍贵稀有的药用植物，其单体红景天苷的获取更为困难，随着相关技术的发展.freel vitisidaea L.和木犀科Phillyrea latifolia L. (Oleaceae)的叶子及小维罗尼卡属Veroniceae植物中也分离出红景天苷［4～6］。 天然红景天苷多是用甲醇从Rhodiola sachalinensis A. Bor中提取而来。而用正丁烷-醋酸盐-水(2∶3∶5, V/V)组成的双相溶剂系统，采用高速逆向色谱法(High-speed counter-current chromatography，HSCCC) 用Rhodiola sachalinensis A. Bor成功地从250 mg天然提取物中一步提取纯度为98%的红景天苷32 mg［7］。用高速层析（high-speed counter-current chromatography，HSCCC）法从Rhodiola crenulata的提取物中分两步纯化也得到红景天苷。第1步，采用由醋酸盐-正丁醇-水（1∶4∶5）组成的双相溶剂系统；第2步，采用氯仿-甲醇-异丙醇-水（5∶6∶1∶4）溶剂系统。1.216 g天然样品中可分离得到纯度为98%的红景天苷21.9 mg。两种方法红景天苷的收率均高于传统提取方法得到的产率［8］。 2 红景天苷的生物转化与生物合成 由于环境恶化和人为过度采挖，野生红景天的数量迅速减少，其愈伤组织和细胞培养的研究成为研究的热点。 用致密愈伤组织(pact callus aggregate，CCA)体系研究红景天苷高产率的培养条件。从R.sachalinensis的根、茎、叶、子叶分离体得到几种愈伤组织，并对其生长速度、红景天苷含量和培养繁殖条件进行筛选，由子叶部位着手进行。确定了生成高产率红景天苷的最佳条件为：接种物为10%，6-苄氨基嘌呤浓度为5 mg·L-1,吲哚-3-酪酸为2.5 mg·L-1，酸性介质和剧烈搅拌可增加其生成量。在介质中加入2,4-二氯苯氧乙酸和红景天苷元同样有利于产物的生成。几种培养基按正确比例组成，红景天苷收率可达到干重57.72 mg·g-1，为野生植物含量的5～10倍，相应的红景天苷产率为555.13 mg·L-1，非常适合于工业化大生产［9］。 人们也一直探索通过植物细胞培养技术来获得高山红景天制品的可能性。但是，在细胞培养中，高山红景天的次生代谢物产量通常较低，这使其经济价值受到质疑。因此，如何提高次生代谢物的含量至关重要。韩爱明等人对高山红景天细胞悬浮培养过程中生长调节物质及主要营养成分的影响进行了探讨，以寻找适台细胞生长和红景天苷积累的较佳培养条件，为细胞大规模培养作准备。实验条件下，最有利于高山红景天细胞培养和红景天苷积累的优化培养基条件应为：基本培养基中氮源浓度为60 mmol·L-1(NH4+：NO3-为1∶1)，KH2PO4浓度为0.5～1.25 mmol·L-1，附加30 g·L-1蔗糖、0.3 mg·L-1NAA，3mg·L-16-BA和200 mg·L-1蛋白胨。在该条件下(接种量为3.2 g·L-1 )细胞培养24 d后，生物量达14.04 g·L-1。干细胞中红景天苷含量为5.66 mg·g-1。 生物转化可提高红景天苷产量，在指数生长期每隔24 h重复3次添加3 mmol·L-1酪醇，红景天苷的产量可达516 μmol·L-1［10］，结果展示了其工业化生产的可能性。随着次级代谢途径和代谢工程的研究与应用，通过植物细胞大规模培养获得所需成分的技术是完全可行的。 文献报道利用苹果种子中的β-糖苷酶作为新型催化剂，使4-取代苯甲醇和红景天苷元与葡萄糖在水-二噁烷单相介质中发生糖基化作用，糖苷产率约13.1～23.1%，其中红景天苷约15.8%［11］。 另外，对红景天苷生物合成路径的研究表明，苷元酪醇是经由莽草酸途径生成的。在此基础上研究的前体及真菌诱导物的加入对红景天苷生物合成的调控作用发现，通过两种调控机制组合运用培养细胞中红景天苷含量达到1.7%，已大大超过野生植株的含量。红景天苷的生物合成为其应用提供了物质基础［12］。 3 生物活性 3.1 抗衰老 3.1.1 抗脂质过氧化在正常情况下，机体自由基的产生与消失是处于动态平衡状态，故不会发生细胞自身破坏的严重后果。但当机体衰老时，机体内清除不了多余的自由基，这样就使自由基的产生与消失失去了平衡。许多研究