组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA阻断MAPK 信号通路并诱导HL60细胞凋亡论文.docVIP

　　组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA阻断MAPK 信号通路并诱导HL60细胞凋亡论文 王颖 王生余 侯春梅 徐元基 杜芝燕 于晓妉 【摘要】 本研究旨在探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂－SAHA（suberoylanilide hydroxamic acid）诱导人急性髓性白血病细胞株HL60凋亡的分子机制。采用MTT法，瑞氏姬姆萨染色和Hoechst33342／PI荧光染色方法，检测SAHA对HL60细胞生长的抑制作用及细胞的形态变化；通过流式细胞术、APK及PI3K/Akt检测结果表明，涉及MAPK信号通路的Raf及ERK激酶磷酸化受到明显抑制.freelTOR激酶的活性没有明显改变。结论：SAHA对HL60细胞的杀伤作用主要是通过诱导细胞凋亡实现，与细胞增殖相关的P44/42 MAPK信号通路被阻断是细胞凋亡发生的机制之一。 【关键词】 组蛋白去乙酰化酶抑制剂；SAHA； MAPK； 信号转导；细胞凋亡；HL60细胞 Histone Deacetylase Inhibitor SAHA Induces Inactivation of MAPK Signaling and Apoptosis in HL60 Cells Abstract The study ed to investigate the molecular mechanisms of histone deacetylase inhibitor SAHAinduced apoptosis of acute myeloid leukemia cell line HL60. The effect of SAHA on HL60 cell proliferation orphological changes sa and Hoechst33342 staining. The cell cycle distribution ined by floetry and the expression of cell signaling proteins edependent manners，after 2 μmol/L SAHA exposure for 12-48 hours, the cell cycle ed by either defined apoptotic bodies stained by Hoechst33342, APK signaling pathic acid）是继HMBA(hexamethylenebisacetamide)之后的第二代羟肟酸类的组蛋白去乙酰化酶抑制剂（histon deacetylase inhibitor, HDACi）。与HMBA相比,它诱导鼠红白血病(murine erythroleukemia, MEL)细胞分化的活性是HMBA的2 000倍，并且在微摩尔(μmol/L)水平即可达到如此高的活性［1］。已知组蛋白的乙酰化状态可以影响基因的表达，当组蛋白处于乙酰化状态时，由组蛋白与DNA双链构成的核小体结构变得更为开放，有利于各种转录因子与DNA的结合，启动基因的表达。而当组蛋白处于低乙酰化状态时， 可出现转录抑制， 并介导肿瘤的发生，因此HDACi已经成为一类新型的抗肿瘤制剂。目前，SAHA已经在美国进入Ⅱ期临床试验。研究表明，SAHA可以选择性诱导细胞周期负调控子p21的表达，从而阻滞细胞周期［2］，同时可以诱导多种肿瘤细胞的分化和凋亡，但其诱导细胞凋亡的分子机制还不十分清楚。本研究采用HL60细胞为研究模型，探讨SAHA诱导其凋亡的分子机制。 材料和方法 细胞系及培养条件 急性髓性白血病细胞HL60为本室冻存保存株，用含10％灭活胎牛血清及青霉素、链霉素（各100 U／ml）、NaHCO3 (2 g/L)、HEPES (2.4 g/L) 的RPMI 1640 (Gibco BRL)培养液，置于37℃、5％ CO2的培养箱中培养。定期换液传代，取对数生长期细胞用于实验。 试剂 SAHA（suberoylanilide hydroxamic acid）由英国阿斯利康公司提供。MTT（methyl thiazolyl tetrazolium）购自Sigma公司,500 mg粉末溶于100 ml PBS中，过滤分装，-20℃避光保存。抗体acetyleH3、PARP、pAkt、Akt、pmTOR、mTOR、pRaf、pErk、Erk均购自Cell Signaling Technology公司。抗CDK4、Raf1抗体购自Becton Dickinson PharMingen公司。抗p21抗体购自SantaCruz Biotechnology公司。抗βactin抗体购自Oncoge