肺康颗粒对慢阻肺模型大鼠气道重塑及转化生长因子β1的影响论文.docVIP

　　肺康颗粒对慢阻肺模型大鼠气道重塑及转化生长因子β1的影响论文 刘建博，韩慧，杨桥榕，张玉芳，劳卫国 【摘要】 【目的】观察肺康颗粒对慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠气道重塑及转化生长因子β1 (TGFβ1)的影响。【方法】将清洁级SD大鼠40只随机分为正常对照组、COPD模型组，肺康颗粒高、低剂量组（剂量分别为13、325g·kg-1·d-1），每组10只。采用熏香烟、气道内多次滴入脂多糖及灌服番泻叶法复制大鼠COPD肺脾两虚型模型。光镜下观察各组大鼠肺组织病理形态学变化并测量肺组织小气道管壁厚度；采用免疫组织化学法并结合图像分析技术测定大鼠肺组织、肺泡巨噬细胞、支气管黏膜上皮TGFβ1的表达。【结果】与正常对照组比较，模型组大鼠小气道管壁厚度及支气管肺组织TGFβ1的表达均有显著性升高（P＜005）；肺康颗粒高、低剂量组上述指标均显著低于模型组（P＜005）；但肺康颗粒高、低剂量组间支气管肺组织TGFβ1表达无显著性差异（P＞005）。模型组大鼠气道和肺组织出现慢性炎症改变和结构破坏.freela公司提供，批号：055:B5，用生理盐水配制为1mg/mL；TGFβ1检测试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司，批号：BA 0290；大前门牌香烟由上海卷烟厂生产，焦油含量23mg/支；EG1140型石蜡包埋机、2255型全自动石蜡切片机、TP1020型生物组织自动脱水机、5010型自动染色机均由德国徕卡公司提供；400型漂烘烤一体机（常州雅博公司）；生物组织显微镜（德国蔡氏）；微量有机分析专用超纯水机（颐洋企业发展有限公司）；恒温生化培养箱(宁波江南仪器厂)；TECAN TYPE酶标仪（Sunrise Remote/TonchScreen）；TDL5A型离心机（上海安亭）；UVmini1240型紫外可见分光光度计（日本岛津）；自制密闭造模箱，大小50cm×50cm×50cm，木质箱体，透明有机玻璃箱盖，箱体壁留有4个直径1cm的通气孔。 13药物肺康颗粒由黄芪15g、西洋参10g、茯苓15g、灵芝5g、丹参15g、甘草5g、法半夏10g等颗粒制剂及冬虫夏草菌粉2g组成。其中各颗粒制剂均购于广东一方制药有限公司，冬虫夏草菌粉购于杭州中美华东制药有限公司，产品批号分别为0706127、070828。将上述方药分别用200mL、50mL温开水溶解制成高、低剂量组肺康颗粒溶液。番泻叶浸液：番泻叶购于广州中医药大学第一附属医院门诊中药房，浸泡12h后，绞汁过滤，装入烧杯，放入40℃的恒温水浴箱中，浓缩至含生药1g/mL，4℃冰箱保存，使用前以0℃冰水混合物降温。 14造模［7-8］及给药正常对照组置于室内正常喂养50d，不作任何干预。其他各组大鼠均采用熏吸香烟加气管内滴注脂多糖法复制肺虚型COPD模型，同时配合灌服番泻叶法复制脾虚型动物模型。具体方法如下：分别于实验第1、14天向气管内注入脂多糖02mL（1mg/mL）；第2～50天(第14天除外)上午将大鼠置于自制密闭造模箱内，注入大前门香烟烟雾，075h/d；第2～50天(第14天除外)中药高、低剂量组分别以13、325g·kg-1·d-1剂量于熏烟前2h灌胃给药；模型组以10mL/kg生理盐水灌胃；并自造模第20天开始，以1g/mL0℃番泻叶浸液(10mL/kg)于下午5时给大鼠灌胃，每日1次，持续30d。 15观察指标及检测方法 151一般情况观察大鼠一般情况，如大鼠的活动度、精神状况、毛发光泽度、体质量变化、口鼻分泌物、气喘、腹泻等。 152标本的采集和处理于第51天，将大鼠股动脉放血处死，取其左侧肺组织及支气管、左右主支气管分叉以上约5mm的气管组织放入20mL体积分数为10%福尔马林液中充分固定 (24h以上)，固定后的标本经充分漂洗，脱水，石蜡包埋，切片。 153肺组织病理学观察对肺组织进行苏木素—伊红(HE)染色，光镜下观察肺组织病理改变，观察内容包括：气管、支气管、小动脉平滑肌是否增生，管腔是否狭窄，细支气管及肺泡腔是否有渗出、水肿、出血或扩张，肺泡隔是否增厚，间质是否增生、水肿及炎细胞浸润等。 154肺组织小气道管壁厚度的测量将经HE染色的石蜡切片置于40倍物镜下，随机取1个视野，利用测微尺，测量其中5个小气道的管壁厚度，每个气道分别测量3点钟及9点钟方向管壁厚度，每个标本共读出10个数值，取其平均值，进行统计学分析。 155支气管肺组织的TGFβ1蛋白表达检测［9］采用链霉卵白素—生物素—酶复合物(SABC)法检测。结果判断：细胞相应部位（细胞核、细胞浆、细胞膜等）出现黄色反应为阳性，根据显色强度和阳性细胞数占总细胞数的比例两项指标判断阳性等级。按显色强度分为无色、淡黄、黄色、棕黄色