骨髓间充质干细胞分离培养方法及其对cd8t淋巴细胞的免疫调控.docVIP

骨髓间充质干细胞分离培养方法及其对CD8+T淋巴细胞的免疫调控 赵小强1，邵 明2，杨海平1，孙 玲3(1河南科技大学临床医学院，河南科技大学第一附属医院血液内科，河南省洛阳市 471023；郑州大学第一附属医院，2输血科，3血液内科，河南省郑州市 450003) 引用本文：赵小强，邵明，杨海平，孙玲. 骨髓间充质干细胞分离培养方法及其对CD8+T淋巴细胞的免疫调控[J].中国组织工程研究，2017，21():682-686. DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.2017.05.005 ORCID: 0000-0001-9456-0073(赵小强) 文章快速阅读： 文题释义： 间充质干细胞的功能：促进缺损组织修复和再生、支持肿瘤靶向治疗、免疫调节功能、支持造血干细胞重建造血。此外，间充质干细胞还对多种免疫细胞(包括树突细胞、T淋巴细胞等)具有免疫抑制作用。骨髓间充质干细胞具有自我更新和多项分化功能，并且能分泌多种生长因子，包括白细胞介素6、白细胞介素11、对正常造血功能和造血细胞分化发挥作用。因此，研究骨髓间充质干细胞在免疫性疾病中治疗、预防中的作用能提高免疫性疾病治愈率。 骨髓间充质干细胞的免疫原性：骨髓间充质干细胞具有弱免疫原性，对T淋巴细胞的作用并不会受到主要组织相容性复合物的限制，并且无论骨髓间充质干细胞源于自供体、受体还是第三者均会产生类似的免疫调节功能。研究中，将1×103、1×104及1×105/well的骨髓间充质干细胞与CD8+T淋巴细胞进行混合，不同浓度骨髓间充质干细胞对CD8+T淋巴细胞均有抑制作用。骨髓间充质干细胞的分离培养方法及其对CD8+T淋巴细胞的免疫调控。 采用骨髓直接贴壁法获得原代Wistar大鼠骨髓间充质干细胞，利用差速贴壁结合消化法纯化原代细胞，加入型胶原蛋白作为细胞外基质，扩增骨髓间充质干细胞。取第2代骨髓间充质干细胞，分别将0，1×103，1×104，1×105 /well的骨髓间充质干细胞与CD8+T淋巴细胞共培养，植物血凝素刺激68 h，荧光CFSE法观察CD8+T淋巴细胞聚集，MTT法检测CD8+T淋巴细胞增殖率。 ①不同密度骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞均有抑制作用，1×103/well组抑制能力最弱，形成集落现象；1×105/well组抑制能力最强，细胞未见明显聚集现象；②1×103，1×104，1×105/well组CD8+T淋巴细胞增殖率分别为44.83±4.92)%、31.94±6.28)%及15.77 ±3.98)%，3组间两两比较差异均有显著性意义P 0.05)；③结果表明，采用全骨髓直接贴壁法能获得原代大鼠骨髓间充质干细胞，采用差速贴壁联合消化控制法能完成细胞纯化，骨髓间充质干细胞浓度依赖性抑制T淋巴细胞增殖。 Isolation and culture of bone marrow mesenchymal stem cells and their effects on immune regulation of CD8+T lymphocytes Zhao Xiao-qiang1, Shao Ming2, Yang Hai-ping1, Sun Ling3 (1Department of Hematology, First Affiliated Hospital, Clinical Medical School, Henan University of Science and Technology, Luoyang 471023, Henan Province, China; 2Department of Blood Transfusion, 3Department of Hematology, First Affiliated Hospital of Zhengzhou University, Zhengzhou 450003, Henan Province, China) Abstract BACKGROUND: Bone marrow mesenchymal stem cells have immunomodulatory properties and have potential applications in immunosuppression. OBJECTIVE: To investigate the isolation and culture of bone marrow mesenchymal stem cells and the immunoregulation of CD8+T lymphocytes. METHODS: Primary bone ma