疏水修饰海藻酸钠纳米粒的制备和鉴定.docVIP

疏水修饰海藻酸钠纳米粒的制备及鉴定 董学猛 刘晨光 (中国海洋大学海洋生命学院, 青岛 266003) 疏水修饰的水溶性聚合物的聚合两亲性分子,在水相中能够通过分子间和分子内的疏水部分之间的相互交联自发的形成胶束或自聚集体。这种纳米级自组织体有一些独特的性质，如特异的流变学属性，相当窄粒径分布，核壳结构，比低分子量表面活性剂更低的临界聚集浓度（CAC）以及热力学稳定性等（Akiyoshi et al., 1996；Kuroda et al., 2002；Kim et al., 2005）。最近，来自天然多糖的自聚集纳米粒由于其良好的生物相容性，生物可降解性，低毒副作用受到人们的特殊关注（Kim et al., 2006）。Kwon 等（2003）以胆固醇为疏水基共价链接到乙二醇壳聚糖上，这种两亲性分子在水液中可以自聚集形成纳米球，而且这种纳米球可以作为潜在的疏水药物和蛋白的载体。 海藻酸钠(Sodium Alginate，SA)是一种线性阴离子多糖，作为一种生物高聚物，海藻酸钠具有很多的优点，比如高的生物相容性、生物可降解性，无毒性，非免疫原性，可鳌合性以及易于化学修饰等。钙离子交连的海藻酸钠凝胶已经广泛用于细菌、蛋白、寡核苷酸或DNA的包载 （Ferreiro et al., 2002；Gombotz et al., 1998；Quong et al., 1998；Simpson et al., 2006；Vandenberg et al., 2001Iwasaki et al., 2004；Wang et al., 2003’-二环已基碳二亚胺 (DCC)买自上海共价化学科技有限公司，分析纯；N’N-二甲基酰胺 (DMF)，甲酰胺，四氢呋喃 (THF)，正己烷，乙二胺，无水乙醇 均为国产商品试剂 AR级；芘(Pyrene) 购自美国Sigma 公司，在无水乙醇中再结晶纯化；超声波细胞粉碎机，荧光分光光度计，动态激光光散射仪，原子力显微镜，JEOL JNM2ECP 600核磁共振仪。 2.方法 （1）海藻酸钠分子量的测定 海藻酸钠0.5g，溶于0.1M NaCl中，配置成0.1％的溶液，然后用乌氏粘度法25℃测定其粘度。分子量计算公式为 M=58×216η M表示分子量，η表示特性粘度。 （2）海藻酸钠的降解 此试验参照梁平方等（1995）方法。取海藻酸钠，加入10倍量（W：V）的盐酸乙醇混合液（V盐酸：V乙醇=9:1Shimadzu RF-5301PC荧光分光光度计测定含芘样品液的发散光谱。 （6）DSA纳米粒粒径的测定 将DSA-15分散于蒸馏水中，超声，制备1mg/ml的透明纳米粒悬液，动态激光散射仪Zetasizer 3000 测定样品的粒径及其分布情况。 （7）纳米粒形态观测 将DSA-15分散于蒸馏水中，超声，制备1mg/ml的透明纳米粒悬液，然后再加水稀释，配成低浓度溶液，静置30min左右，取5μl修溶液滴在新鲜剥离的云母片上，并加入5μl无水乙醇固定，室温自然干燥， 原子力显微镜成像观察。 二、结果 1．DSA耦合物的合成与性质 通过乌氏粘度法测定，本试验所用海藻酸钠的分子量为1.3×105。 首先我们用DCC和NHS把DOCA活化，然后利用无水乙二胺在其羧基上引入一个初位氨基，随后我们以EDC为交连剂，用化学交连的方法以酰胺键的形式把DOCA-NH2链接到酸化海藻酸钠的羧基上，制备成DSA耦合物。EDC被成为一种“零长度”交连剂，它可以在分子间形成酰胺基的链接而不会留下间隔分子。EDC可以和酸化SA的羧基反应形成一种活性酯中间物，这个中间物可以和DOCA-NH2的初位氨基反应形成酰胺键。这样就得到了疏水修饰的海藻酸钠两亲性分子。通过控制DOCA-NH2与海藻酸钠之间的摩尔比例，就可以制备出不同取代度的DSA耦合物。 图1（A）显示的是DSA的1H NMR光谱。与图1（B）海藻酸钠的光谱相比较，在1.1-1.2ppm上出现了一些新峰，这个新的质子峰对应于脱氧胆酸上的固醇H，由此证明了活化的DOCA确实链接到了海藻酸钠的羧基上面。 图1 DSA与SA的1H NMR 图谱 （A）DSA溶于氘代二甲基亚砜，（B）SA溶于重水 2．临界聚集浓度的测定 临界聚集浓度是指聚合两亲性分子在水相中通过分子间和分子内的形成自聚集体的开始浓度。临界聚集浓度(CAC)是一个很常用的用来衡量自组装聚合体稳定性的常数(Kataoka et al.,2001)，我们利用荧光光谱法对其进行测定。荧光光谱法是研究聚合物胶束化行为的有力手段。目前常用荧光探针在不同环境中溶解性及其光谱特性的差异来研究相关体系的性质。芘作为一种具有特征荧光发射谱的典型疏水化合物，常用作探针来研究水溶液中疏水微区的形成，并用于测定其临界聚集浓度(CAC)。 室温