群体与个体的细胞分析技术介绍-中心实验室.PDFVIP

药学院中心实验室仪器技术讲座系列之十一 群体与个体的细胞分析技术介绍 报告人：区敬华 日 期：2014.04.06 目录 1.群体的细胞分析技术-流式细胞仪（FCM ） 2.个体的细胞分析技术-激光共聚焦显微镜（confcal ） 群体的细胞分析技术 FCM(flow cytometry )流式细胞术是在保 持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破 坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子 水平上获取多种信号对细胞进行定性/量分析 或纯化分选。 群体的细胞分析技术 原理： 1、采用激光作为激发光源，保证其具有更好的 单色性与激发效率； 2、利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记 技术，保证检测的灵敏度和特异性； 3、用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细 胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证 了检测速度与统计分析精确性。 群体的细胞分析技术 技术特点： 1、数量检测：5000个以上细胞 2 、信息量大：同时标记多参数 3、灵敏度高：检测荧光信号 4 、快速：几秒到几分钟 5、自动化：自动进样器 6、分选回收：分选功能 群体的细胞分析技术 。 群体的细胞分析技术 结构系统： （1） 液流系统 （2） 光学系统 （3） 数据处理系统 群体的细胞分析技术 液流系统  由样本和鞘液组成  待测细胞 单个细胞的悬液 荧光染料标记的单抗对其染色 受清洁气体压力 从样品管进入流动室形成样本流  鞘液：辅助样本流被正常检测的基质液。主要作用是包裹样本流的周围， 保持样本流中细胞处于喷嘴中心位置，防止其靠近孔壁而阻塞喷孔。 群体的细胞分析技术 群体的细胞分析技术 光学系统  激光光源：488nm气冷式氩离子激光器  分色反光镜：反射长/短波长，通过短/长波长  光束成形器：两十字交叉放置的透镜  透镜组：形成平行光，除去室内光  滤片：长通、短通、带通  光电倍增管：FS, SS （散射光）， FL1, FL2, FL3, FL4 （荧光） 群体的细胞分析技术 光学系统 Flow Tip SS and FL Detector FS Detector Laser 群体的细胞分析技术 数据处理系统： 1、信号收集软件 2、处理软件 基本过程 已标记的单细 硅化管 流动室 形成稳态 喷嘴 水平激光与之 荧光染料被 胞悬液和鞘液 单细胞液柱 垂直相交 激发发光 荧光检测系统和 收集光信号 光电倍增管 脉冲信号 放大 计算机系统 散射光感受系统 分析结果 群体的细胞分析技术 应用： 细胞组成 细胞功能