高效液相色谱法 HPLC实践技术SOS专区---.doc

HPLC问题SOS求助规则 本规则根据天舒主任起草的药品标准SOS专帖改编而成，如有好的建议，请跟贴说明或pm我，谢谢！? --------求助与应助者必读 一、求助与应助规则1、本帖只是药品、食品的HPLC技术问题求助帖，与HPLC技术问题无关的帖请勿在此求助!2、求助者发帖前请先搜索一下你所求助的HPLC技术问题是否已经有战友求助过，若没有求助过，再发帖求助。3、求助者发帖请尽量按照如下格式发帖求助：[药品名称]：[色谱条件]：[色谱图]：4、应助不限于格式与方式，直接帖出也可，附件也可，传真E-mail也可，但要尽可能表达清楚您的意思!5、求助者得到帮助后最好跟帖说明一下，您根据应助者提供的资料，是否真正解决了问题，还有哪些疑问，并分享您解决问题的经验。6、未尽事宜，以后再补!提醒：在求助HPLC技术问题之前，请各位先搜一下本版的旧帖整理帖或以前的HPLC技术问题专贴，看是否有战友求助过，这样也节省了您的时间，同时也使我们的资源得到充分利用!谢谢合作!回应： 我想请教一下衍生和不衍生在做高效液相时有什么区别，因为有些物质不用衍生用高效液相也能做出来，那为什么还要用衍生这种方法呢？谢谢！?紫外衍生化是指将无紫外吸收或吸收很弱的物质与带有紫外吸收集团的衍生化试剂进行反应，产生可用于紫外检测的化合物。衍生化通常分为柱前衍生化和柱后衍生化，相对而言，柱后衍生化应用更广泛。通过衍生化能显著提高检测灵敏度和选择性。柱后可见光衍生化检测经常用于过渡金属离子的分析，将过渡金属离子柱流出物与显色剂反应，生成有色配合物后，在可见光波长下检测。做高液要不要衍生，要看具体情况而定，一般来说如果不需衍生就能测定，而且灵敏度不是很差，就不必使用衍生化，毕竟衍生化是比较烦琐的。目前使用柱前衍生化的都是迫不得已才采用的。回应：我正在做头孢噻吩钠的含量测定，药典规定流动相是醋酸溶液－乙睛（3：1），可是出的峰型非常难看，拖尾非常厉害，开始以为是柱效不行，但是做别的好得很，请哪位高手指教应如何改进，不想参照英国药典！应为那样将要做大量验证工作！谢谢，急盼我想一个可能的原因是不是你样品中药物的浓度太高了，信号溢出了，另外，如果各个浓度都一样，又不想换柱子可以试试加点三乙胺什么的，把你的流动相组分调整一下，当然要查一下资料。我也遇到过类似情况，当然柱子的柱效也是一方面的原因了， 1.流动相的保存期限要具体问题具体分析，如果是有机相（或者纯水）则可以保留4-5天，当然肯定是保留时间越短越好了，在做实验时可以估计一下大概需要多少，不要过滤过多的有机相或纯水。如果是甲醇：四氢呋喃：乙腈：水/30：10：30：30，因为水相还是占相当大的比例，通常不宜超过1-2天。如果含缓冲盐的则最好当天用完，不要留置过夜，用不完也要倒掉，这是为了保护好机子起见，保存期限与缓冲盐的浓度有关系，越浓越不宜保留，总之，我认为缓冲盐溶液都不宜保留超过24小时，HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。如果你的液相有在线Seal-wash功能，则能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。通常缓冲盐的浓度在0.1mol或大于0.1mol时,必须使用该在线冲洗选项. 我认为一次性配制的缓冲盐不能用3天，无论是从为了防止长菌还是析出盐方面考虑。我觉得做液相也要事前作好各方面的计划，作到心中有数，这样即可以保护好机子设备，又能节省溶剂，不要为了图一时的方便而因小失大！ 2、单纯的甲醇冲洗柱子的时候用了1周有必要需要重新超声脱气（如果你的机子有在线脱气功能的话则不必重新脱气，现在出的大多数机子有这功能），超声时间一般为10-15MIN。 3、过滤流动相的时候，1张滤膜大概可以过滤多少毫升流动相并没有明确的规定，看情况而定，国外都是一次性的用，但在国内，由于国情的原因，大多数单位还是重复使用，我觉得只要自己认为脏了就可以换了，过滤过含缓冲液的滤膜就不宜再过滤不含缓冲液的流动相，当然如果经济不允许的话，就另当别论了。顺便给你点建小提示： A：请严格执行溶剂过滤。 B：请勿使用多日存放的蒸馏水及磷酸盐缓冲液 C：如果应用许可，可在溶剂中加入0.0001---0.001M的叠氮化钠. D：避免使溶剂瓶暴露在直射阳光下，尽量使用琥珀色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液。 RE：请问：我的柱压为什么一直很高？每天做完后我用于5%的甲醇0.2ml/min冲过夜，第二天用甲醇冲30min后再进行工作。 柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，我建议你可按下面步骤检查问题的起因。 1、拆去保护柱，