血红素加氧酶-一氧化碳系统在百令胶囊水提物对抗STZ损伤大鼠胰岛细胞的作用论文.docVIP

　　血红素加氧酶/一氧化碳系统在百令胶囊水提物对抗STZ损伤大鼠胰岛细胞的作用论文 兰海涛，郑倩，王亚平，刘红 【摘要】 目的观察百令胶囊(Corbrin Capsule,CC) 水提物对胰岛细胞的保护作用及其机制与血红素加氧酶/一氧化碳系统的关系。方法)、正常对照组(NC)、CC水提物组、CC水提物组+ZnPP，28 d后检测血糖，血清胰岛素分泌量、CO含量、HO-1活性。离体培养乳鼠的胰岛细胞.freelechanisms.Methods The pancreases of the rats oved to collect islet cells. The cells odel easured by glueter . HO-1 activity ,CO content proved the islet cell activity damaged by STZ,and the amount of basic insulin secretion and stimulated by high glucose proved(P 0.05). The content of CO and activity of Cco synthase in supernatant aged group and in the serum of diabetic rats, and there aged groups .Activities of HO-1 and CO aged group and diabetic rats as pared to normal control group,and the aged group and diabetic rats.ConclusionI-1640培养液，制成细胞悬液，37℃,.freell，置96孔板培养，每孔内加入细胞悬液200μl。随机分组：①正常对照组;②STZ组;③STZ+ CC组;④STZ+CC组+ZnPP组。每组平行孔为6 孔。正常对照组以含15%胎牛血清的RPMI-1640培养液培养，在STZ组和STZ+CC、 STZ+ CC组+ZnPP组以1.0 mmol/L的STZ作用20 h后，再分别加入浓度CC 20 mmol/L或(和)10μmol/L的ZnPP继续培养30 h，进行各项检测。 2.2 四唑盐比色法(MTT法)检测细胞活性将处理完毕的各组细胞用MTT法进行检测。检测方法如下：将各组细胞离心(500 r/min，5min)，小心吸取细胞培养上清液，于细胞中加200 μl的培养液(不含小牛血清)和5 mg/ml的MTT 20 μl，放入CO2孵育箱培养4 h后，再离心(1 000 r/min，×10 min)，弃上清，加入二甲基亚砜200 μl，振荡5 min，在全自动酶标仪上比色，测出每孔光密度值(OD值)进行比较，检测波长为600 nm，OD值越高表明细胞活性就越强。 2.3 细胞培养上清液胰岛素分泌量测定各组待测标本细胞培养上清液，用放免法检测胰岛素的基础分泌量;各组细胞中加入含16.7 mmol/L的葡萄糖培养液培养2 h，离心提取上清液，按放免法进行高糖刺激胰岛素分泌量检测。 2.4 STZ糖尿病模型的建立和分组体质量200～220 g的健康雄性)40只和正常对照组(NC)10只。禁食12 h后DM组一次性腹腔注STZ 65 mg/kg(用0.1 mol/L pH4.5的缓冲液配成2%的溶液)，3 d后选择尿糖强阳性，血糖≥12.7 mmol/L者为DM大鼠。NC组注射等体积柠檬酸缓冲液，将成模的DM大鼠随机分4组，DM组、CC组和CC+ZnPP组。CC组给予CC水提物5 mmol/kg，1次/d鼠腹腔注射;CC+ZnPP组给予CC水提物同时腹腔注射ZnPP 0.5 mmol/kg;DM组腹腔注射等体积柠檬酸溶液。各组大鼠28 d后处死。 2.5 糖尿病大鼠血清标本以0.5%戊巴比妥钠1 ml/kg体质量腹腔注射，待动物麻醉后，体外心脏采血5 ml，血液凝固后，取血清1～2 ml，4℃冰箱保存待检。 2.6 糖尿病大鼠血清胰岛素水平的测定放免法测定血清胰岛素水平。 2.7 细胞培养液和血清HO-1活性测定方法参照文献4取血清20 μl,加入2 mmol/L正铁血红素40 μl，4.5 mmol/L NADPH 40 μl,0.1mol/l KH2PO4(ph 7.4)1.8 ml及正常标准的肝组织匀浆上清夜20 μl,混匀后，37°C振荡水浴避光反应2 h，置冰上终止反应。用分光光度计在463 nm和530 nm双波长测吸光度值，并计算出反应生成的胆红素生成量。胆红素摩尔吸光系数为40 nm/cm，以生成的胆红素量表示HO-1活性，单位为pmol/(mg