蒙药冷蒿的遗传多样性随机引物多态性分析论文.docVIP

　　蒙药冷蒿的遗传多样性随机引物多态性分析论文 刘越 潘宁，黄怡鹤，温婧，周廉 【摘要】 目的研究内蒙古通辽地区蒙药冷蒿的遗传特异性及通辽、呼和浩特、锡林郭勒3个不同地区蒙药冷蒿的遗传多样性。方法采用随机引物多态性(RAPD)方法，从17组RAPD引物中筛选出13组条带清晰、多态性明显并且重复性好的引物用于实验，并利用Popgen32和NTSYS软件进行数据计算与聚类分析。结果①13组引物共产生的209条带中，有201条多态性带，多态位点百分率达96.17%。② 3个地区蒙药冷蒿Ht=0.238 1.freelisia frigida in Tongliao population and three different regions of Inner Mongolia (Tongliao, Hohhot, Xilingol). Methods13 groups of primers orphic and reproducible bands the 17 groups of primers by random amplified polymorphic DNA (RAPD) method. The bands produced by the 13 groups of primers ers generated 209 bands, including 201 polymorphic bands. The percentage of polymorphic loci ation isia frigida population ong populations (Dst) ong populations (Gst) the geic variation ong populations. Key isia frigid population; Improved CTAB; RAPD; Geic diversity 蒙药冷蒿Atremisia frigida(蒙语：阿给)，又名小白蒿、菟毛蒿，菊科蒿属的小灌木，是蒙医的常用药，主要分布在内蒙古1～3。近年来，随着中药材标准化进一步深入，为提高中药质量和临床效果，中药材的道地性的研究越来越受到重视4～6。但对民族药的道地性研究甚少。长期以来，蒙药冷蒿一直在民间用于出血疾病的治疗7。研究发现，不同产地来源的蒙药冷蒿制炭后止血效果差异显著，而且来自荒漠草原的蒙药冷蒿制炭后活性成分的含量偏高。目前，冷蒿药材来源为野生冷蒿，随着荒漠化的进程，以及药材的大量开采，将使冷蒿变成濒危物种。为了避免野生药用植物的枯竭，势必要进行药材的规范化栽培种植(GAP)，对冷蒿遗传背景的分析，不但可以从遗传学角度观察引起冷蒿质量变异的原因，也可以为冷蒿栽培种植提供理论指导。 在PCR基础上建立起来的随机扩增多态性(random amplified polymorphic DNA，RAPD)分子标记技术，以其技术简单易行，分析速度快，成本低，不用进行DNA克隆、southern杂交等复杂程序的优点，特别适合于遗传背景不清楚的材料的研究，在中药材鉴定与遗传多样性研究中应用广泛8～10。本实验采用RAPD方法，考察冷蒿的遗传结构，探讨冷蒿止血活性成分变异的遗传学基础。 1 材料 2007-11分别在呼和浩特、锡林郭勒盟当地收集冷蒿干药材;2008-09在内蒙古通辽市奈曼旗采集冷蒿植株，并用冰块冷冻保存。3个冷蒿群体编号见表1，群体间空间距离大于500 km。 2 方法 2.1 基因组DNA的提取与测定基因组DNA采用改进的CTAB法11提取。DNA大小及其完整性采用标准浓度的λDNA/HindⅢ检测，采用SAM 3000微量紫外/可见分光光度计测定A260、A280 及A230，据此推知各样本总DNA的含量。 2.2 RAPD引物的筛选参照王静12以及本实验室11的方法，优化PCR反应体系，对单一DNA样品多引物进行RAPD-PCR扩增。在Bio-RAD Gel Doc 2000凝胶成像系统上观察拍照。最后，筛选出可产生多态性且重复性好的引物组合。表1 材料来源 Tongliao)E122.16 500350～450沙地31株H呼和浩特 N40.82(Hohhot)E111534.6荒漠草原药材L锡林郭勒 N43.95(Xilingol)E115典型草原药材 2.3 数据处理与统计分析构建二元数据矩阵，RAPD为显性标记，同一引物的扩增产物在电泳中迁移率相同的条带被认为是同源性的，属于同一位点的条带按清晰可见的强带或反复出现的弱带记为1，无带记为0，形成二元数据矩阵。 根据“0-1”原始矩阵，用Popgen32软件计算多态位点比率(P)、Nei s遗传多