表达结核分枝杆菌Ag85B与GST融合蛋白的DNA疫苗构建及免疫保护研究-论文.docVIP

　　表达结核分枝杆菌Ag85B与GST融合蛋白的DNA疫苗构建及免疫保护研究*论文 .freelIL-2和mIFN-γ的平均含量分别为(339.9±59.4)pg/ml和(432.1±74.4)pg/ml，显著高于3个阴性对照组（P 0.001），与BCG免疫组差异无显著性(P＞0.05)。5个组的平均mIL-6和mIL-10差异无显著性。pVS85BG免疫组小鼠的脾、肝和肺的平均结核菌菌落数分别为(32954.2±4457.5)CFU/g，(32748.0±3634.4)CFU/g和(31741.7±7293.7)CFU/g，分别低于pVAX1、pIL2S和PBS等3个阴性对照组的相应器官的结核菌载量（P 0.001），同时也显著高于BCG免疫对照组。结论 构建的DNA疫苗pVS85BG能够刺激机体产生抗结核菌所需的Th1型免疫应答，免疫鼠抵抗H37Rv攻击的能力显著增强。 【关键词】 结核； DNA疫苗； 细胞因子； 免疫保护 【Abstract】 Objective To evaluate the ability to produce cytokines in vitro and the protective efficacy of the mice immunized by the TB DNA vaccine pVS85BG id pVS85BG expressing fusion protein of Mycobacterium tuberculosis Ag85B and glutathione S-transferase ale C57BL/6 in bred mice in 5 groups immunized es ice in each group ined for hIL-2， mIL-2， mIFN-γ， mIL-6 and mIL-10 by sandice in each group the spleens， lungs and livers.Results The average concentrations of mIL-2 and mIFN-γ in the supernatants from pVS85BG immunized mice l and (432.1±74.4)pg/ml， significantly higher than those from the pVAX1， pIL2S， and PBS injected controls (P 0.001). No significantly difference has been observed for the mIL-6 and mIL-10 concentrations from the mice in all 5 groups. The average M tuberculosis loads in the spleens， livers and lungs in the pVS85BG immunized group munized group munized controls.Conclusion TB DNA vaccine pVS85BG mune response munity to H37Rv challenge in the immunized mice. 【Key tuberculosis； TB DNA vaccine； cytokines； immune protection 有效控制结核病的流行，除了政府重视，加强健康教育，采取一般性的预防措施和即时发现并治愈痰涂阳性肺结核病人以外，有效预防结核病的疫苗的普遍接种是关键［1］。大量实践证明，BCG对控制原发结核、降低粟粒性结核和结核性脑膜炎的发病率是肯定的。近十几年，世界各地进行了8次BCG现场试验，结果是矛盾的。在欧洲、加拿大和美国部分地区进行的试验保护率较高，总发病率下降70%～80%。但在美国南方和南印度的结果相反，保护效果很差［2，3］。因此，寻求安全、稳定、效果更好的结核疫苗一直是结核病和疫苗专家工作的重点。本研究利用基因操作技术，将具有免疫保护作用的蛋白Ag85B(antigen 85B)和具有使表达合蛋白稳定的谷胱甘肽-S转移酶（glutathione S-transferase， GST）的基因连接，插入美国FDA推荐可用于人体的表达载体pVAX1中，构建表达结核菌保护抗原Ag85B与GST的融合蛋白的真核表达载体。提取并纯化该质粒后，免疫纯系近交系C57BL/6小鼠，免疫小鼠抵抗经静脉注射结核菌H37Rv攻击的能力显著增强。报告如下。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 结核菌H37Rv