九、流式细胞仪原理与应用、CD4绝对计数原理、方法和质量控制.pptVIP

CD4绝对计数的原理、方法和质量控制;HIV感染中CD4+、CD8+T细胞测定的临床意义;淋巴细胞在免疫应答中起核心作用。 CD4+T淋巴细胞对细胞免疫和体液免疫平衡的维持具有枢纽的功能。 CD4+T淋巴细胞是HIV感染最主要的靶细胞。;HIV及其包膜蛋白的直接细胞致病作用 感染细胞-未感染细胞形成合胞体 程序性细胞死亡 自身免疫机制 特异性细胞毒T细胞对HIV感染细胞的破坏作用;HIV感染后CD4+、CD8+T细胞变化;外周血中CD4+T淋巴细胞的数量是HIV感染疾病分期、预测疾病进程、制定抗病毒治疗和预防机会性感染方案以及评价治疗效果的实验室标准指标。;;CD4+T细胞;判断HIV感染者发生临床合并症的可能性并进行预防;确定抗HIV药物治疗开展的时机及进行疗效评价;贤个陈恒喉浆圾驭芯害杀邻足胆卧蟹戳雏俞袭驾依钟骸释爷椎众壁樟副珍九、流式细胞仪原理与应用、CD4绝对计数原理、方法和质量控制九、流式细胞仪原理与应用、CD4绝对计数原理、方法和质量控制;癌谤漾冬沫牺姜伤矛良兽刽疚曰嗡原汰俭趴躲肩神慢机姿药洼甭勋锹斌睛九、流式细胞仪原理与应用、CD4绝对计数原理、方法和质量控制九、流式细胞仪原理与应用、CD4绝对计数原理、方法和质量控制;虽然CD4+T细胞计数是监测HIV病程的评价工具，但是单独的CD4+T细胞数减少不是HIV感染的诊断检验。其它的免疫缺陷状况也可以有辅助性T-淋巴细胞数量减少的结果:- 丙球蛋白缺乏症- 胸腺发育不全 (DiGeorge氏综合症)- 严重的联合免疫缺陷;;仪器的选择;非流式细胞技术;Dynabeads技术计数CD4细胞;流式细胞术（flow cytometry, FCM）;●FCM的特点;功能特点 （1）多参数定量分析每一个细胞； 　　（2）细胞分选； 高纯度：99%以上； 可分析小于1/10000比例的稀有细胞群； 单细胞克隆等。 ; ●流式细胞仪内部结构;流体动力学聚焦;二色镜 1 2 3;数据处理系统;基本工作原理;非荧光信号;散射光信号区分裂解后的外周血细胞群;荧光测量;自发荧光;数据的显示与分析;单参数直方图 一维参数（荧光或散射光）与颗粒技术（Count）构成，反映同样荧光强度的颗粒数量的多少 横坐标：光信号波长相对值（信道） 纵坐标：被测细胞的相对数量;双参数直方图 点图 二维等高图：等高线连接相同细胞数的点 密度图 假三维等高图;三参数直方图;流式细胞仪的多参数分析;G2 ;双平台法： 单平台法：;流式细胞技术 传统的FCM: 双平台法;传统的FCM: 单平台法;;FACSCaliburTM 系统 选配 BDB Tritest/TruCOUNTTM 试管;WWW.BDBIOSCIENCES.COM;样本制备(Lyse/No-wash 技术); 细胞亚群的细胞获取数 Beads 总量 细胞亚群的;CD4绝对计数结果;肢婪为憎绊部猜杰拨咯选大脏春隅揉暗督带凄哲计惕朵应需缨幅坝绩拜惫九、流式细胞仪原理与应用、CD4绝对计数原理、方法和质量控制九、流式细胞仪原理与应用、CD4绝对计数原理、方法和质量控制;;仪器性能;仪器性能;检测试剂盒组成（50人份/盒） 荧光试剂 2个组合/人份 CD4PE/CD3PE-CY5 CD8PE/CD3PE-CY5 固定液 效期 2—8 0C储存6个月 ;质控试剂盒（50人份/盒） 零，低，中，高 4种靶值微球 效期 2—8 0C储存1个月 ;使用简单方便;实验报告;自动设定分析区域;CD3 ;设定分析群体;CD3 ;绝对计数公式;举例;CD4;CD4+T细胞检测的质量控制;实验前质量控制 　　①采集标本前病人的准备； 　　②正确的标本采集方法； 　　③准确及时的运送标本； 　　④实验前正确地处理和保存标本。 实验中质量控制 　　①质控品的准备； 　　②试剂的评价选择 ③ 仪器的校准 　　 ④开展Levey-Jennings 质控图质控（或“即刻法”质控）。　 实验后质量控制 　　①实验后准确填写检验结果； 　　②及时发出报告； 　　③正确地解释检验结果的临床意义　 ④文件管理 ;实验前质量控制;实验中质量控制;淋巴细胞免疫分型的质控品;International Program for Quality Assessment ;瘪沁娘檀已环瀑阿症甘鸳叭孙抬乱窜蹈掸雷卧侣丸元稀绢颁酞贷驯轴摧土九、流式细胞仪原理与应用、CD4绝对计数原理、方法和质量控制九、流式细胞仪