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漆酶催化氧化卤代酚的研究 制作者：康艺瑾、袁雅男、姜静 指导教师：陆隽鹤 Logo 漆酶活性的测定 目录 1 漆酶催化氧化卤代酚的动力学研究 2 HA 对漆酶催化氧化卤代酚转化的影响 3 金属离子对漆酶催化氧化卤代酚转化的影响 4 Logo 漆酶酶活性定义：一个单位酶活性相当于在pH3.8 的条件下，每分钟氧化1molABTS 所需的漆酶量。 测定方法：向1mL 比色皿中依次3.0mL0.3mmol·L-1 ABTS 溶液（pH3.8）和0.01mL 漆酶溶液，配成混合溶液，用Varian Cary50 紫外分光光度计检测其在420nm处吸光度随时间的变化速率（r）。酶活性计算公式如下： 漆酶活性的测定 1 Logo Diagram 2 研究条件及步骤 室温、30mL 透明反应瓶中进行，反应液 100μmol·L-1 卤代酚0.01mol·L-1 磷酸盐缓冲液，控制pH 为5.8 +0.02 往溶液分别加入浓度为0.1,0.2,0.5、1.0,2.0unit·mL-1 的漆酶充分震荡反应液，以保证反应过程中所需的溶解 待反应1、2、3、4、5、6h 时取出0.5mL 样品，立刻与0.5mL 甲醇混 合，使酶失活，终止反应，分析样品中残留的卤代酚含量。 2 漆酶催化氧化卤代酚的动力学研究 Logo 实验试剂与材料 漆酶溶液、缓冲溶液、HA 溶液、卤代酚：2-溴代（2-BP）、4-溴代酚（4-BP）、2-氯代酚（2-CP）、4-氯代酚（4-CP） 实验条件 室温、反应液pH 为5.8±0.02，反应过程充分振荡反应液保证溶解氧 实验步骤 反应在30mL 透明反应瓶中进行，反应液中含有一种100μmol·L-1 卤代酚（2-BP、4-BP、2-CP、4-CP）及固定漆酶浓度为1.0unit·mL-1，HA 设置4个不同的浓度，分别为5、10、20、40mg·L-1。反应总时间为6h，反应过程中每隔1h取样，分析 HA 对漆酶催化氧化卤代酚转化的影响 3 卤代酚 2-BP 4-BP 4-CP 2-CP 反应底物 Logo 反应底物为2-BP Logo 反应底物为4-BP Logo 反应底物为2-CP Logo 反应底物为4-CP Logo 推断反应机理 第一种可能机理是HA 存在导致漆酶失活 第二种可能机理是HA 与卤代酚竞争漆酶，导致卤代酚的转化速率降低 第三种可能机理是HA 可以还原漆酶氧化卤代酚的中间产物 Logo 将1unit·mL-1 的漆酶溶液分别加入不同浓度（5、10、20、40mg·L-1）的HA 中，2h 后测酶活性，以不加HA 作为对照，结果表明漆酶活性没有多大变化。 推断一 Logo 反应组加入定量的漆酶，然后加入不同量了HA作为底物(5、10、20、40mg·L-1)采用紫外光谱直观表征HA 在反应中的变化。经过观察，随着反应的进行，不同浓度的HA 与对照（不加漆酶）相比紫外光谱均未发生变化。 推断二 Logo 推断三？ Logo 利用漆酶催化氧化4-硝基酚时， 与对照（未加Cu2+）相比，加入5mmol·L-1 的Cu2+，卤代酚去除效率降低约30%， 当Cu2+浓度增大到 10mmol·L-1时，转化速率下降近50%。 但是，当Cu2+浓度为1mmol·L-1时，会小幅度促进了卤代酚的转化。 由此得出，Cu2+通过影响漆酶的活性，而影响卤代 酚的转化。如图所示 金属离子对漆酶催化氧化卤代酚转化的影响 4 Logo Diagram 2 金属离子对漆酶催化氧化卤代酚转化的影响 4 Logo Diagram 2 金属离子对漆酶催化氧化卤代酚转化的影响 4 研究结论： 通过对实验结果研究，Cu2+对酶活性影响的规律与其对有机污染物去除的规律类似，低于1mmol·L-1 的Cu2+会增强漆酶活性，但Cu2+浓度过高时则会对酶活产生抑制作用，其中的反应机理尚不清楚。Ca2+、Mg2+分别存在时，卤代酚的去除和漆酶的活性几乎未受到影响。 Thank you