氧载体正十二烷对灵芝三萜液态深层发酵的影响.pdfVIP

食用菌学报@2016．23(2)：52～58 氧载体正十二烷对灵芝三萜液态深层发酵的影响 冯杰，冯娜，唐庆九，杨 焱，刘方，张劲松‘ (上海市农业科学院食用菌研究所，农业部南方食用菌资源利用重点实验室，国家食用菌工程技术研究中心， 国家食用菌加工技术研发分中心，上海市农业遗传育种重点开放实验室，上海201403) 摘 要：为了有效的提高灵芝(G口，lDde，m口f“c谢“m)菌丝体液态深层发酵合成灵芝三萜的能力，研究了氧载 体正十二烷对灵芝三萜发酵的影响。以灵芝三萜浓度为指标，采用单因素实验对正十二烷的添加量和添加时 间进行初步确定，再利用中心组合设计对灵芝菌丝体液态深层发酵中氧载体正十二烷的添加工艺进行优化。 mL 结果表明，在发酵的第25．63小时添加29．85mL／L的正十二烷，灵芝三萜浓度理论值为0．84g／L，在500 摇瓶和5L发酵罐中验证，得到灵芝三萜的浓度分别为0．85g／L和O．88g／L，相比对照组分别提高了578％ 和398％。 关键词：灵芝；深层发酵；氧载体；正十二烷 灵芝(G伽Dderm口f“c磁“m)是我国名贵的药用真菌之一，具有扶正固本、滋补强壮、延年益寿、维 持机体平衡等功效‘1|。灵芝三萜是灵芝主要的活性成分之一，具有抗肿瘤、保护肝脏、抗HIV·1及 HIV．1蛋白酶活性、抗组织胺释放、抗衰老、抗菌、降血脂和降血糖等作用[2]。目前获取灵芝三萜的材 料有3种，一是野外子实体或人工栽培的子实体，二是灵芝孢子，三是液体发酵菌丝体和发酵液[3]。由 于野生灵芝资源稀缺，而人工栽培子实体周期长(3个月以上)，成本高，受环境和原材料等限制，质量不 稳定，且子实体木质化程度高，功能产物提取利用率较低，从而影响灵芝三萜的应用与研究。通过液态 深层发酵技术生产灵芝三萜具有不受季节影响、生产周期短、菌丝体中三萜类化合物含量相对稳定等 特点，现已成为获取灵芝三萜的最有效方法H-5]。尽管经过几十年来的研究，液态深层发酵灵芝三萜已 取得不少成果，但是到目前为止，灵芝三萜的产量仍然不能满足其应用的需求，是制约其广泛研发及应 用的一个瓶颈。 在灵芝菌丝体的液态深层发酵过程中，菌丝体生长以及灵芝三萜的生物合成都需要氧的参与， 因此，溶解氧对于灵芝菌丝体的发酵过程具有重要影响。目前，在采用液态深层发酵方法来生产灵 芝菌丝体及其代谢产物的过程中，往往需要不断地向培养液供氧，以满足灵芝菌丝体生长代谢的需 要。氧作为好氧发酵必需底物之一，相对其它底物来说，由于其在培养液中溶解度极低，常常成为细 胞生长的限制性因素之一。进行正确适宜的供氧，是灵芝菌丝体液态深层发酵高产灵芝三萜的 关键‘引。 近年来，在发酵体系中添加氧载体越来越受到人们的重视。氧载体与发酵液形成的体系具有氧传 递速度快、能耗低、气泡生成少、剪切力小等特点，能在不增加能耗的基础上提高氧传递效率。这样的 反应系统不仅适合于好氧高密度发酵，而且也适合于如溶氧功耗高、或因剪切力作用大而难以进行大 规模培养的脆弱细胞的培养，多年来它一直是生化工程中很活跃的领域之一。氧载体提高氧传递，关 键是氧载体在气液界面上起作用。一些学者认为像正十二烷等这类具有正铺展系数的氧载体加入到 水中后，通过搅拌、超声波等作用被分散乳化，由于正十二烷-水的相互排斥，氧载体最终将集中在气液 界面上，形成一覆盖气泡的膜，由于氧载体相对氧气来说具有较强的溶解度，使得氧穿过水边界层的渗 收稿日期：2016—03—29原稿；2016—05—05修改稿 基金项目：上海市市级农口系统青年人才成长计划资助项目(沪农青字2015第1·7号)和上海市农业科学院青年科 技人员“助跑”计划(ZP06)资助 作者简介：冯杰(1983一)，男，博士，助理研究员，主要从事食药用菌发酵调控和优化研究。 。本文通讯作者 E-mail：syjal6@saas．sh．cn 万方数据 第2期 冯杰，等：氧载体正十二烷对灵芝三萜液态深层发酵的影响 透力增强，从而有利于氧传递的进行[7]。 在前期的研究中，笔者发现在灵芝液态发酵培养基中通过添加氧载体正十二烷，可以改善培养基 中的溶氧环境。本文在此基础上主要研究了正十二烷的添加浓度和时间对灵芝菌丝体生长及