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分光光度计的基础知识 紫外?可见吸光光度法 紫外?可见吸光光度法的特点 具有较高的灵敏度 一般物质可测到10-3?10-6mol?L-1。适用于微量组分的测定。 有一定的准确度 该方法相对误差为2%?5%，可满足对微量组分测定的要求。 操作简便、快速、选择性好、仪器设备简单。 可测定大多数无机物质及具有共轭双键的有机化合物 物质对光的选择性吸收 光的吸收定律?朗伯-比耳定律 其数学表达式为： 可见分光光度计 紫外可见分光光度计 单色器 分光光度计的类型 * * 教案首页 授课顺序： 学时： 日期：20 年 月 日 班级： 课后 分析 教具 挂图 1、复习2、引入3、讲课4、复习 教学 过程 分光光度计的组成部件 各部件的性能 重点 难点 了解分光光度法的特点 掌握分光光度计的基本组成部件及其性能 了解分光光度计的类型 目 的 要 求 分光光度计的基础知识 课 题 ★利用被测物质的分子对紫外?可见光具有选择性吸收的特性而建立的分析方法称为紫外?可见吸光光度法。 ★是研究在200-800nm光区内的分子吸收光谱的一种方法 ★广泛地用于无机和有机物质的定性和定量测定，是常用的分析方法之一。 有色光的互补色 光的互补：蓝?? 黄 ★溶液之所以呈现不同 的颜色，是与它对光的选择性吸收有关。 ★当一束白光（由各种波长的色光按一定比例组成）通过一有色溶液时，某些波长的光被溶液吸收，另一些波长的光不被吸收而透过溶液。 ★例如，CuSO4溶液强烈地吸收黄色的光，所以溶液呈现蓝色。 布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关系。A∝b 1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有类似的关系。A∝ c 二者的结合称为朗伯—比耳定律 A＝lg（I0/It)= εb c 式中 A：吸光度；描述溶液对光的吸收程度； b：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位； c：溶液的摩尔浓度，单位mol·L－１； ε：摩尔吸光系数，单位L·mol－１·cm－１； 或: A＝lg（I0/It)= a b c c：溶液的浓度，单位g·L－１ a：吸光系数，单位L·g－１·cm－１ a与ε的关系为： a =ε/M （M为摩尔质量） 1入射狭缝 2准直透镜 3棱镜 4聚焦棱镜 5出射狭缝 棱镜单色器的原理示意图 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。 ①入射狭缝：光源的光由此进入单色器； ②准直装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束； ③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅； ④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝； ⑤出射狭缝。 样品室 样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。 检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。 ★单光束分光光度计 结构简单，价格便宜。主要适用于定量分析，而不适用于作定性分析。另外，结果受电源的波动影响较大。 ★双光束分光光度计 将光源的光束分成两路，并分别射入参比池和试液池，这样消除了单光束受光源强度变化的影响。 能进行波长扫描，并自动记录下各波长下的吸光度，很快就可得到试液的吸收光谱。所以能用于定性分析。 双波长分光光度计不仅可测定多组分混合试样、混浊试样，而且还可测得导数吸收光谱。 双光束双波长分光光度计 采用两个单色器，光源的光束经两个单色器后分别产生波长不同的两单色光，由切光器使两单色光以一定的时间间隔交替通过同一吸收池，并被光电递增管交替接收，测得吸光度差，试样中被测组分的浓度与两波长处的吸光度差成比例，这是双波长法的定量依据。