组织捣碎及细胞破碎.ppt

原理：在膜腔中装入小玻璃球或小钢球，在搅拌浆的作用下，它将使细胞悬浮液与细胞悬浮液，细胞悬浮液与玻璃小珠、石英砂或氧化铝一起发生碰撞、剪切，使细胞在某种程度上破碎，再由液珠分离器分开、排出。（这些装置的主要缺点是在破碎期间样品温度迅速升高，通过用二氧化碳来冷却容器可得到部分解决。） 构件：微珠、冷却装置、搅拌浆、液珠分离器、物料进出口。见图 高速珠磨机 电声超声波发生器 * 1.2.2 组织捣碎及细胞破碎 （一）细胞壁的结构和特点 （二）细胞破碎机理 （三）细胞破碎方法 教育技术中心 1.植物细胞 2.微生物细胞 G+细菌和G－ 酵母细胞 真菌菌丝细胞壁 （一）细胞壁的结构和特点 成 分 G+ G - 肽聚糖磷壁酸类脂质蛋白质 含量很高（30～95）含量较高（50）一般无（2）?0 含量很低（5～20） 0含量较高（020）含量较高 革兰氏阳性细菌的和革兰氏阴性细菌细胞壁构造 革兰氏阳性细菌与阴性细菌的细胞壁成分(占细胞壁干重的%) （二）细胞破碎的机理 压缩力和剪切力 改变细胞壁或细胞膜的结构，增大目标产物的溶出率 完全溶解细胞的保护屏障－细胞壁 （三 ）细胞破碎的方法 1.物理破碎 （1）高压匀浆器 （1）高压匀浆法 工作原理：剪切，碰撞 影响高压匀浆器破碎效果的因素 压力：通常采用的压力为55～70Mpa 温度： 通过匀浆器的次数：1～2 阀与阀座间距 高压匀浆器原理利用高压迫使细胞悬浮液通过针形阀，由于突然减压和高速冲击撞击环造成细胞破裂,从低压环境释放出来。 （1）高压匀浆法 注意： 易造成堵塞的团状或丝状真菌； 较小的革兰氏阳性菌； 含有包含体的基因工程菌 。 珠磨机 工作筒 （2）珠磨法 搅拌器 工作原理：剪切，碰撞 （2）珠磨法 影响因素珠磨效率的因素 珠体的大小：实验室规模，珠径为0.2mm较好，工业规模，不得＜0.4mm 珠体在磨室中的装量：控制在80%～90%； 搅拌速度： 操作温度：操作温度在5～40℃范围内 被处理细胞的特性： （3）超声波破碎法 工作原理 空穴现象引起工作液局部区域压力差 ，从而产生一个极为强烈的冲击波压力，由它引起的粘滞性旋涡在介质中的悬浮细胞上造成了剪切应力，促使细胞内液体发生流动，从而使细胞破碎。 影响因素 仪器的功率 介质的离子强度 pH值 菌体的种类和浓度 （4）渗透压冲击法 细胞 高渗溶液 脱水 低渗溶液 吸水破裂 反复冻融法 干燥法 X-press法（冻结-撞击法） 2.化学法 （1）酶法 原理： 外加酶法 细菌类：溶菌酶 ， G+需配合EDTA 放线菌：溶菌酶 *