实验九血清总胆固醇的测定.pptVIP

实验九 血清总胆固醇的测定 1 实验目的 ⑴ 掌握血清胆固醇测定在健身运动中的应用价值； ⑵ 了解影响血清胆固醇测定准确性的主要环节。 2 实验原理 再与同样处理的胆固醇标准溶液在546nm波长下比色测定，即可求样品中总胆固醇的含量。 胆固醇是一种仅含于动物性食物中的固醇类物质。正常浓度生理范围内，它是维持人体新陈代谢不可缺少的原料，也是抗老防衰、延年益寿的重要物质。 胆固醇影响食物中摄取和体内生物合成，大多由肝脏合成。血清胆固醇值取决于摄取后被吸收的量，在体内合成的量与利用的量，以及从十二指肠排出后再吸收和粪便中排泄量的平衡。血清胆固醇不受一次性的膳食和运动的影响（血液浓缩是有影响的），在短期内，不易受膳食内容的变化和运动的影响。 血清总胆固醇测定方法很多，有称量法、比蚀法、碘量法、层析法与比色法等。而以分光光度法用得最多。分光光度法则又因所用显色剂不同而有各种不同的方法。 目前常用的有醋酐-硫酸显色法和三氯化铁-硫酸法。前者虽操作简便快速，但显色稳定性较差，血清色素的干扰较大，后者灵敏度高，显色稳定，较醋酐-硫酸法优越。 在胆固醇的比色分析中，一类是先经抽提、分离；然后再是显色定量。另一类是直接向血清中加入显色剂。由于胆固醇的呈色反应特异性较差，直接测定往往受血清中其它因素的干扰，故测得结果不如先抽提、分离后再显色的准确。 血清经无水乙醇处理后，蛋白质被沉淀，上清液中胆固醇与浓H2SO4及Fe3+作用，生成较稳定的紫红色化合物。再与同样处理的胆固醇标准溶液进行比色，即可求总胆固醇的含量。 3 实验器材与试剂 血清总胆固醇测定试剂盒，分光光度计，水浴锅，离心机，离心管，移液枪，采血针，采血管，酒精，棉签。 4 实验方法与步骤 ⑴ 采集少量指尖血液于0.2ml离心管中，5000rpm离心10分钟，用移液枪小心吸取上清液按下表加入测定试剂盒试剂。 加入物（μl） 空白管 标准管 测定管 蒸馏水 3.0 — — 标准液 — 3.0 — 表3-13血清总胆固醇测定试剂盒的操作 血清 — — 3.0 试剂 300.0 300.0 300.0 蒸馏水 1000.0 1000.0 1000.0 混匀，置于37℃水浴6分钟，以空白管调节零点，分别测定标准管和测定管的吸光度值。冷至定温后（不超过2小时），用546nm波长，以空白管校正零点，读取各管吸光度。 ⑵ 计算 ：正常参考值：2.33—5.69mmol/L（90—220mg/dl） 5 注意事项 胆固醇的显色反应受水分和温度的影响，因此，所用的试管、吸管比色杯均须干燥。 6 思考题 ⑴ 血清中胆固醇有几种存在形式？了解测定血 清总胆固醇在运动训练学中的应用意义。 ⑵ 试述有氧运动改善血脂代谢、降低血胆固醇的机制。