快速鉴定和大量纯化质粒DNA的方法.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing) 4(5)： 28-301982 快速鉴定和大量纯化质粒DNA的方法 张林元 张兆山 军（事医学科学院基础医学研究所，北京） 为了快速鉴定重组质粒DNA,Birnboim等 NaOH 浓度从 0.2N 提高到0.4N 以及变性时 人川建立了快速碱性抽提法。在此基础上，我 间从，分钟缩短到1分钟外，基本上按照 们作了某些修改，不仅较有效地防止了质粒 Birnboim等人的方法进行。 DNA变性形式的出现，而且可以用来大量抽提 2.碱变性修改法 以抽提 100ml培养物 质粒DNA。若再协同轻基磷灰石柱层析121和酸 中的质粒为例。将培养过夜的 E.coliKH802 酚法61〔处理，可获得纯度较高的质粒DNA。我 (pBR322）种子液，按2%的接种量转种培养 们用修改法提取了分子量从2.6X106-26X106 瓶，370c:振荡培养至 OD。一0.6时，如氯霉 道尔顿的4种不同质粒DNA，均收到了比较理 素至终浓度175pg/ml，继续培养12-16小时。 想的结果，特别对于难于抽提的或大质粒DNA 350