植物组织培养技术（高教版）电子教案：植物组织培养操作技术03.docVIP

第2章 植物组织培养技术 第三节 植物组织培养操作技术（3） 一、授课章节 二、学时安排 2学时 三、教学目标 1．掌握培养基母液的配制技术。 2．掌握培养基的配制、分装包扎技术。 3．掌握培养基高压灭菌技术。 4．掌握无菌操作技术。 四、教学重点、难点分析 重点： 1．培养基母液配制。 2．培养基的制备技术。 3．培养基的高压蒸汽灭菌。 4．无菌操作技术。 难点： 1．培养基母液、培养基配制的计算。 2．无菌操作技术步骤的剖析。 五、教具 电化教学设备 六、教学方法 讲授法， 七、教学过程 Ⅰ.导入 II.新课 ●单配法：将培养基配方中的各种成分分别配成一定浓度的母液。一般mg/mL表示。 ●混配法：将几类营养成分按配方中的用量扩大一定倍数称量，分别溶解后各类混合在一起定容到一定体积配成混合母液。 （2） （3）母液配制要求 ●母液浓缩倍数：大量元素10～20倍；微量元素100～200倍；铁盐100倍；有机物100～200倍。 ●选用蒸馏水，分析纯或化学纯试剂，防止沉淀。 ●激素母液浓度：0.5～1mg/mL，1次配成50mL或100mL （4）药品用量的计算：配制母液时药品用量(mg)=配方用量(mg)×浓缩倍数×制备容量（L） （5）母液配制技术 以MS培养基为例，配制过程如下： 表1 MS培养基母液配制（单位：mg/L） 母液种类 成分 规定量 扩大倍数 称取量 母液体积(mL) 配1L培养基吸取量(mL) 大 量 元 素 KNO3 NH4N03 MgSO4·7H20 KH2P04 CaCl2·2H2O 1900 1650 370 170 440 10 19000 16500 3700 1700 4400 1000 100 微 量 元 素 MnS04·4H20 ZnS04·7H20 H3B03 KI Na2Mo04·2H20 CuS04·5H20 CoCl2·6H20 22.3 8.6 6.2 0.83 0.25 0.025 0.025 100 2230 860 620 83 25 2.5 2.5 l000 10 铁 盐 Na2EDTA FeS04·4H20 37.3 27.8 100 3730 2780 1000 10 有 机 物 甘氨酸 盐酸硫胺素 盐酸吡哆醇 烟酸 肌醇 2.0 0.1 0.5 0.5 100 100 200 10 50 50 10000 1000 10 ●大量元素母液 配成浓缩10倍的母液。用感量0.01g托盘天平按表2-4称取药品，分别加入100mL左右蒸馏水中，再用磁力搅拌器搅拌促进溶解，然后倒入1000mL容量瓶中，再加水定容至刻度，成为10倍母液。注意Ca2+和SO42、PO43易发生沉淀，因此CaCl2·2H2O充分溶解后最后加入。 ●微量元素母液 配成浓缩100倍的母液。用感量0.0001g分析天平按表2-4准确称取药品后，分别溶解，混合后加水定容至1000mL。 ●铁盐母液 配成浓缩100倍的母液，用感量0.01g托盘天平按表2-4称取药品，分别溶解，混合后加水定容至1000mL。 ●有机物母液 配成浓缩100倍的母液。用感量0.001g分析天平按表2-4分别称取药品，溶解，混合后加水定容至1000mL。 ●每种激素必须单独配成母液，浓度一般配成0.5～1mg／mL，用时根据需要取用。多数激素难溶于水，要先溶于特定溶剂，然后才能加水定容。具体方法为：IAA、IBA、GA、NAA等先溶于少量95％的酒精中，再加水定容到一定体积；2，4-D可用少量0.1mol/L的NaOH溶解后，再加水定容到一定体积；Kt和BA先溶于少量0.1mol/L的HCl中再加水定容。 （6）母液的保存 将配制好的母液分别倒入试剂瓶中，贴好标签，在标签上注明母液名称，配制倍数与日期。然后放入冰箱内4℃低温保存，用时再按比例稀释。 2.培养基的配制 （1）培养基配制工艺流程 （2）培养基制备的操作步骤 ●确定培养基配方及用量：根据培养对象、培养目的等，通过查阅资料及咨询等确定培养基配方，然后据外植体的数量和试验处理的多少确定培养基的用量。 ●称取琼脂、蔗糖：用托盘天平分别称取0.6%～1%的琼脂、2%～3%的蔗糖。 ●培养基熬制：量取纯净水放入加热容器，纯净水的体积应少于所配制培养基体积，约占终体积的2/3~3/4，加入称量好的琼脂和糖，接通电源加热。边加热边搅拌，防止糊底和溢出，至完全溶化。 ●母液取用量的计算： 基本培养基配方成分母液取用量（mL）=1000÷浓缩倍数×制备培养基的体积（L）； 生长调节物质母液取用量（mL）=配方中的浓度（mg/L)÷母液浓度（mg/mL) ×制备培养基体积（L） ●移取母液：根据计算出的母液用量，按大量元素、微量元素、铁盐、有机成分、植物激