凌风草组织培养体系的建立要点.docVIP

凌风草组织培养体系的建立 李春平， 李名扬，易小林，皮 伟，李 娜 西南大学 园艺园林学院 花卉研究所，重庆 400716 摘 要：以凌风草为材料，通过对该植株再生条件的优化，获得适宜凌风草愈伤组织再生的外植体材料和基本培养基，建立凌风草愈伤组织再生体系。试验结果表明：愈伤组织诱导的最适外植体为凌风草种子；愈伤组织诱导的最适基本培养基为MS培养基；愈伤组织诱导的最佳培养基为MS + 2 , 4-D 3.0 mg/ L + 6-BA 0.3 mg/ L；愈伤组织分化的最佳培养基为 MS +NAA 0.1mg/L + 6-BA 1.0mg/L + KT 2.0mg/L；生根最佳培养基为MS + NAA 0.2 mg/ L + C 0.2 g/ L。 关键词：凌风草；外植体；再生体系；基本培养基 凌风草（Briza media）属于禾本科凌风草属多年生草本植物，作为观赏价值颇高的新一代园林植物，具有自然质朴，色彩丰富，适应性好，管理成本低的独特景观和生态功能，越来越显示出它的园林应用方面的优势。但是由于凌风草多用分株方法繁殖，繁殖量受到很大限制，市场上成品苗价格又比较昂贵，以及地区气候条件的差异，使得凌风草的推广应用受到一定限制，尤其是重庆地区夏季长时间高温干旱天气，给其生长带来不利的影响。因此，本研究通过对凌风草愈伤组织诱导、分化、生根条件的的优化，从外植体材料选择到愈伤组织的诱导与分化建立了一完整的技术路线，为凌风草的遗传转化利用，快速培育抗旱耐高温新品种奠定了基础。 目前，植物组织培养技术已应用于多种植物的人工培养，包括单子叶和双子叶植物，并成功获得了再生植株[1,3]。但对于多数单子叶植物来说，特别是禾本科植物，通过组织培养再生植株难度较大，禾本科植物的组织培养再生相对较困难，主要适用的外植体较单一[4, 6]。迄今为止，只有部分禾本科植物可以通过组织培养再生出完整植株，如小麦[7，8]、水稻[9]、草地早熟禾[10，11]、画眉草[12]、蒲苇[13]、杂交狼尾草[14]等。 1 材料与方法 1.1 试验材料 1.1.1 植物材料 本试验所用材料为凌风草，由浙江虹越花卉有限公司提供。 1.1.2 培养基 MS培养基[15]，N6培养基[16]。 1.1.3 主要试剂 包括植物生长调节剂及其他试剂，主要有：2，4-（2，4-D）6-苄基腺嘌呤（6-BA）（NAA）（KT）2 实验方法 1.2.1 外植体的制备 首先，直接将凌风草种子（由浙江虹越花卉有限公司提供）在常温下浸泡24h，用无菌水冲洗3次，然后用75%酒精和0.1%氯化汞进行灭菌处理，边消毒边振荡，以使灭菌充分。其次，将凌风草种子播种于穴盘中，一个月后移栽至黑色聚乙烯塑料盆于温室中生长，3个月后取其植株，剥去老叶，分别切取4cm左右的茎段和嫩叶，用无菌水冲洗3次，然后用75%酒精和0.1%氯化汞进行灭菌处理，边消毒边振荡，以使灭菌充分。 1.2.2 诱导培养基的筛选 将外植体接种到含有不同激素配比的愈伤组织诱导培养基上，26oC暗培养30-40d，统计算出出愈率，以出愈率最高的作为愈伤组织的诱导培养基。 1.2.3 继代培养愈伤组织 选择生长旺盛，颜色淡黄，结构紧密的愈伤组织，从外植体上剥离后接种到继代培养基上，继续暗培养30d。 基金项目：重庆市建委项目（城科字2007第53号）资助． 作者简介：李春平，1984-，女，重庆黔江人，硕士研究生，主要从事生物技术与花卉育种研究． 通讯作者：李名扬，教授，博士生导师． 1.2.4 愈伤组织的分化与再生培养基筛选 分别选取继代培养后的愈伤组织于分化培养基上，观察愈伤组织的分化情况，记录分化率，确定最佳分化培养基配方及最佳继代时间。26oC，12h光照培养20d。统计分析再生植株培养结果，计算再生率，确定最佳生根培养基。 所有的培养基均添加0.6%卡拉胶，3%蔗糖，pH值调节至5.8。 诱导率=（出愈外植体数/接种外植体数）×100% 分化率=（出芽愈伤数/接种愈伤数）×100% 生根率=（生根愈伤数/出芽愈伤数）×100% 2 结果与分析 2.1 愈伤组织的诱导 2.1.1 不同外植体和基本培养基对愈伤组织诱导的影响 由表1可见，凌风草种子、幼叶、茎段分别接入不同激素配比的两种基本培养基，研究结果见表1，以MS出愈率最高(39.0%)，故确定MS培养基为凌风草诱导愈伤组织的基本培养基, 同时研究发现，单独使用2 ,4-D时，凌风草的出愈率较低；种子的出愈率比较高(39.0%)，在继代与分化时易于存活、分化，而用幼叶、茎段作为外植体不能形成愈伤组织；茎段 15d 后褐化，叶片 20d 后褐化死亡。故采用成熟种子作