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南台科技大學 生物科技系 專題報告 Bacillus amyloliquefaciens最適化培養 專題生：496H0016簡怡如、496H0042邱浩哲 指導教授：張春生 教授 中華民國100年5月目　　次 目次 1 表目錄 3 圖目錄 4 第一章 緒論 研究目的和動機 5 文獻回顧 1.2.1芽孢桿菌屬的簡介 6 1.2.2液化澱粉芽孢桿菌的簡介 7 碳、氮源以及微量元素對菌的生長影響 7-8 第二章 材料與方法 2.1實驗材料及藥品 2.1.1實驗菌種 9 2.1.2培養基種類與組成 2.1.3實驗藥品與材料 2.2實驗方法 2.2.1菌種保存 2.2.2菌種培養 2.2.3菌體定量 2.2.4生長曲線 2.2.5培養基的篩選 17-18 第三章 結果與討論 19 3.2碳、氮源篩選結果 19 3.3微量元素篩選結果 20 3.4複合式培養機篩選 20 第四章 結論 30參考文獻 表目錄 .1 醫學上重要的革蘭氏陽性細菌 6 表2.1 不同培養基的比較 18 圖目錄 圖2.1 Bacillus amyloliquefaciens檢量線 圖3.1 Bacillus amyloliquefaciens生長曲線 圖3.2 碳源篩選 圖3.3 氮源篩選 圖3.4 有無添加MgSO4．7H2O是否有影響 圖3.5 微量元素之比較 圖3.6 在不同濃度下的MgSO4．7H2O 圖3.7 碳氮源的取代比較 圖3.8 在複合式培養基，不同濃度下的MgSO4．7H2O 圖3.9 在複合式培養基中，有無添加MnSO4．5H2O 圖4.1 最佳化培養基選擇 第一章 緒論 1.1 研究目的和動機 澱粉水解酵素，是將澱粉水解成單醣、雙醣或寡醣之能力，早期是由大麥麥芽(barleymalt)中分離出來，亦可取自動物體中，目前大多來自於細菌及黴菌所分泌，其中有幾種具有水解效應的酵素，已經在工業上大量使用，而α-澱粉水解酵素為內切型酵素(endo-amylase)，其可作用於直鏈澱粉(amylose)及支鏈澱粉酵素(amylopectin)之α-1,4鍵結，並以隨機水解機制進行，生成葡萄醣、麥芽醣、短鏈直鏈澱粉及含有α-1,6分支點之有限糊精(limit dextrin)，因而該類型酵素經常被使用於澱粉工業之液化(liquefaction)或是澱粉轉化醣加工以製造各種醣漿。工業程序上主要是將澱粉水解成葡萄糖，而葡萄糖可直接利用或進行化學合成、發酵程序抑或是進一步轉化成果糖(fructose)，特別是HFCS(high-fructose corn syrup) 的生產。由於其甜度大約為蔗糖(sucrose)的兩倍，在日常生活上的重要性已漸漸增加，成為家中食物甜份的來澱粉水解酵素本研究的主要工作是要將液化澱粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)培養至最大產量，以便日後可以純化及量產成產品之研究探討。本研究利用了微生物發酵的概念來培養液化澱粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)並篩選找尋最適化的碳源、氮源以及微量元素。並且期望可以提高整體產量並以最低成本及簡單操作過程達成預期的目標。 1.2 文獻回顧 1.2.1 芽孢桿菌屬的簡介 芽孢桿菌屬（Bacillus spp.）為，，芽孢桿菌屬芽孢桿菌屬包含枯草桿菌（Bacillus subtilis）、液化澱粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）、與炭疽桿菌（Bacillus anthracis）等。也就是說，枯草桿菌包含在芽孢桿菌屬內，枯草桿菌為芽孢桿菌的一種，但芽孢桿菌的範圍較大，所以芽孢桿菌不等於枯草桿菌。 1.2.1液化澱粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)的 液化澱粉芽孢桿菌為革蘭氏陽性菌，菌體長0.7~0.9×1.8~3.0μm，菌體，會產生內生孢子，孢子為橢圓狀，在產孢過程中，孢子會生長於菌體中心，但不會造成菌體膨脹。液化澱粉芽孢桿菌生長最佳溫度在30~40℃，15℃以下和50℃以上菌體不易