Annexin V-FITC 试剂盒 （仅供研究使用）.pdfVIP

Annexin V-FITC 试剂盒 （仅供研究使用） 目录号 储存温度 规格 有效期 FAK012 / FAK015 / FAK011 4℃ 20 / 50 / 100 Tests 见试剂盒标签 实验原理 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS ）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期， 细胞膜中的磷脂酰丝氨 酸（PS ）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD 的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂 酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标 之一。将Annexin V进行FITC标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用流式细胞仪可 检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶（Propidium Iodide , PI ）是一种核酸染料，它不能透过完整 的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将 Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。 试剂盒组份 1. 浓缩结合缓冲液 4x (Binding Buffer 4x) 体积：3ml / 8ml / 15ml （4 倍浓缩液） 稀释后溶液中各组分浓度：10mM Hepes/NaOH, pH 7.4, 140mM NaCl, 2.5mM CaCl2 2. 碘化丙锭溶液 （Propidium Iodide ）（避光保存及使用） 体积：210ul / 500ul / 1ml 浓度：20ug/ml 3. 重组人 Annexin V-FITC （避光保存及使用） 来源：大肠杆菌（E.coli ） 分子量：35.8 KDa 体积 ：100ul / 250ul / 500ul ，可用于20 / 50 / 100 次实验 保存方法：于 50mM TRIS, 100mM NaCl, 1%BSA, 0.02%NaN ,pH7.4 溶液中保存 3 纯度：SDS和反相 HPLC 检测表明其纯度大于 98% 实验染色方法 标记的Annexin V 可用流式细胞仪进行检测细胞外膜上的磷酯酰丝氨酸，实验操作流程如下： 1. 用去离子水将浓缩结合缓冲液稀释至 1x ，可根据实际需要量稀释； 2. 用 PBS 轻轻洗涤细胞两次 ； 5 3. 用 200ul 结合缓冲液重新悬浮细胞并使其浓度为 2-5×10 /ml ； 4. 取 195ul 的细胞悬液加入 5ul Annexin V-FITC ，轻轻混匀后室温避光孵育 10 分钟 ； 5. 用 200ul 结合缓冲液洗涤细胞，再用 190ul 结合缓冲液重悬细胞，加入 10ul 浓度为 20ug/ml 的碘化丙锭溶液 ；轻轻混匀后上流式细胞仪（FACS ）进行检测分析。 注意事项 1 ：细胞标记染色后请尽快上机检测，不宜长时间放置。 2 ：PI 有毒，操作时请戴手套，注意防护。 建议 对于初次检测的试验者为了调试机器的补偿和象限的分区，建议设立实验对照管： 1 ：未染色的细胞管 2 ：只用Annexin V-FITC 染色的细胞管 3 ：只用PI 染色的细胞管 参考文献 1. Jinxi He, Juan Shi, Kangjian Zhang, et al. Sox2 inhibits Wnt-β-catenin signaling and metastatic potency of cisplatin-resistant lung adenocarcinoma cells [J]. Molecular Medicine Reports, 2017. 2.Cheng D, Zhang L, Yang G, et al. Hepatitis C virus NS5A drives a PTEN ‐PI3K/Akt feedback loop to support cell survival[J]. Liver Internationa