DNA探针在羧基聚苯乙烯微珠表面的微阵列研究-中国科学.PDF

( B 辑) 第30 卷 第4 期 SCIENCE IN CHINA ( Series B ) 2000 年8 月 DNA 探针在羧基聚苯乙烯微珠表面的 微阵列研究* ** 黄承志 李原芳 黄新华 范美坤 (西南师范大学环境化学研究所, 重庆 400715) 摘要 报道在 1-乙基-3-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺(EDC)偶链剂存在下, 5 -NH2 单末端和5 -Tex / 3 -NH 双末端修饰DNA 探针在 10 m 羧基功能微珠表面的微阵 2 列特性. 研究表明, DNA 探针在微珠表面的微阵列能力决定于溶液介质的pH, DNA 探 针浓度和微珠总表面积. 优化条件下, 20 mer 单链DNA 探针在微珠表面微阵列的最小 分子间距约为14 nm, 而20 mer 双链DNA 分子微阵列的最小分子间距约为27 nm. 如 果DNA 探针序列长度由20 增加到35 mer, 探针在微珠表面的微阵列密度降低. 机理 研究表明, DNA 探针在羧基功能微珠表面的微阵列方式是探针分子近平行于微珠表面. 关键词 DNA 探针 聚苯乙烯微珠 微阵列 杂交 近期生物芯片(biochip) 的开发表明: 单个微芯片(microchip)应用于生化分析在速度和价格 上及自动化等方面都具有广泛的应用前景. 理论上, 开发生物芯片是基于生物探针分子在固 相支持物上进行高密度微阵列(high-density microarray), 待分析样品则通过分子识别与探针分 [1] 子作用并产生可供检测的高灵敏信号 . 固相支持物上探针的微阵列通常是通过探针与固相表面的活性官能团之间进行化学偶联 反应实现的. 固相表面涉及到固态硅片(solid-state silicon wafers) 及亚微米乳液微珠 (submicrometer latex spheres)[1] 玻片(glass)[2~4] 凝胶 (gel)[5] 硝化纤维素(nitrocellulose)和尼 [6] 龙滤膜(nylon filter membrane)等 . 当结合到固相支持物表面的探针分子完成与样品靶分子的 识别以后, 多余样品很容易通过洗涤除去. 探针分子与样品靶分子间的分子识别常涉及到抗 [6] [7] 体与抗原 , 碱基互补的单链DNA 之间的杂交反应等 . 尽管合成寡聚核苷酸与互补DNA 序 列的杂交已成为分子生物学研究的基本技术, 但均相介质中 DNA 杂交需要分别监控配对和 未配对DNA, 需要利用诸如光吸收(UV 光谱) 圆二色光谱 量热法 荧光探针和NMR 光谱, 而所有这些技术都需要大量试剂(x mg/mL 级)并分离配对与未配对的DNA. 微珠表面已广泛应用于分子识别和传感器平台中. 将待分析对象结合到粒子如细胞和微 珠表面可应用到包括免疫分析 蛋白质-蛋白质作用 蛋白质-脂质体作用 DNA- 蛋白质作用 [8, 9] 和酶学等方面. 近几年来