无病毒苗木培育.pptVIP

第十章 无病毒苗木培育 1952年Morel等培养大丽花茎尖获得第一株植物脱毒苗，1955年又获得了马铃薯脱毒苗。20世纪70年代，几乎所有生产马铃薯的国家都在生产中使用这一技术，到1975年，用该技术生产脱毒种薯的马铃薯品种已达150个左右。 1974年中国科学院植物研究所等开展马铃薯茎尖培养脱毒技术的研究及应用推广工作，80年代中期脱毒马铃薯进入生产阶段，90年代中期脱毒马铃薯已经覆盖了我国的大部分马铃薯产区，创造了可观的经济效益。 一、植物脱病毒的机理 病毒在植物体内的分布是不均匀的，在茎尖中呈梯度分布。 在受侵染的植株中，顶端分生组织无毒和含毒量极低。较老组织的含毒量随着与茎尖距离的加大而增加。 分生组织含毒量低的原因可能是： 1）植物病毒自身不具有主动转移的能力，无论在病田植株间还是在病组织内，病毒的移动都是被动的。在植物体内，病毒可通过维管束组织系统长距离转移，转移速度较快，而分生组织中不存在维管束。病毒也可通过胞间连丝在细胞间移动，但速度很慢，难以追赶上活跃生长的茎尖。 2）在旺盛分裂的细胞中，代谢活性很高，使病毒无法进行复制。 3）在植物体内可能存在着病毒钝化系统，它在分生组织中比其他任何区域具有更高的活性。 4）在茎尖中存在高水平内源生长素，可抑制病毒的增殖。 一、茎尖培养脱毒（一）通过茎尖培养脱毒的原理 1、病毒在植物体内的分布 病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎尖或根尖，离体培养便可获得无病毒再生植株。 2、茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生组织不能合成自身需要的生长素，但下部叶原基能提供，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎尖越大，脱毒效果差。 （二）茎尖脱毒方法1、取样与消毒 可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶芽与侧芽消毒接种 。 消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒左右，用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消毒10-20分，最后用无菌水冲洗材料4-5次。 3．培养 25+2℃ ，1500-5000LX，10-16h 一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度可形成大量从生芽。4．生根诱导 诱导生根的方法是将2-3cm高的无根苗转入生根培养基继续培养1-2个月可生根。 （三）培养基与培养方式 1、培养基：MS， White , Morel等 2、培养方式：一般采用半固体培养基。（四）影响茎尖脱毒效果的因素（茎尖脱毒技术的关键） 植物种类、病毒种类、剥离茎尖的大小（0.3-0.5mm带1-3个叶原基）、培养基营养 二、热处理脱毒 脱毒原理 即热处理脱毒，一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（35-40度）即钝化失活。 1、温汤浸渍处理脱毒法 材料置于50℃左右热水中浸渍几十分钟到数小时。 特点：简单易行，成本低，但易使材料受伤。适用：甘蔗、木本植物和休眠器官的处理。  2、热空气处理脱毒法 将植物用35～40℃的热空气处理2～4周或更长时间。特点：损伤较小，操作简便，须严格控制温度时间适用：多数植物 三、其他组织培养脱毒方法（一）愈伤组织培养脱毒 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病害毒植株的方法，即愈伤组织培养脱毒法。 部分愈伤组织细胞不带病毒可能有以下两方面的原因：一是愈伤组织细胞分裂增殖速度快，而病毒复制速度较慢，赶不上细胞的繁殖；二是愈伤组织发生了抗病毒突变。 （二）珠心胚培养脱毒 柑橘类种子为多胚种子，除具有合子胚外还有珠心胚，种子一般不带病毒，因此珠心胚植株不易带病毒。（三）微尖嫁接脱毒 指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖（0.14-1.0mm,带3-4个叶原基），以培养脱毒苗的技术。脱毒程序：无菌砧木培养——茎尖准备——嫁接——嫁接苗培养——移植。 第二节 脱毒苗鉴定一、直接检查法 直接观察待侧植株生长状态是否异常，茎叶上有无特定病毒引起的可见症状，从而可判断病毒是否存在。二、指示植物法 将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物作为指示植物，用以检验待测植物体内特定病毒的存在。即指示植物法。 特点：条件简单，操作方便，经济而有效，只能测出病毒的相对感染力。 三、抗血清鉴定法特异性高，测定速