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尿液结核分枝杆菌检测对肾结核诊断价值[摘要] 目的 探讨尿液结核分枝杆菌检测在肾结核诊断中的应用价值。方法 对54例已确诊为肾结核的患者尿液标本分别采取抗酸菌涂片染色、改良罗氏培养、荧光定量PCR三种方法进行检测，其结果进行分析。结果 抗酸菌涂片染色、改良罗氏培养、荧光定量PCR检测尿液中结核分枝杆菌的阳性率分别为25.9%、51.9%、72.2%。结论 尿液结核分枝杆菌检测属病原学检测，特异性好、操作简便，对肾结核的诊断有着重要的应用价值 [关键词] 尿液； 结核分枝杆菌； 肾结核； 诊断 [中图分类号] R527.1 [文献标识码] A [文章编号] 1005-0515（2011）-12-362-01 结核病是目前严重威胁人类健康的重大传染性疾病之一[1]。近年来，随着结核病发病率在全球范围内的回升，肾结核的发病率也明显增加。据统计，全球每年有近千万人感染结核病，而肾结核约占其中的8%-20%[2]。该病进展隐蔽，发现时，肾功能已部分或完全丧失，患者早期诊断困难，以致延误治疗，对人们的身体健康危害极大。因此早诊断对治疗尤为重要。在众多辅助检查中，除病理诊断外，实验室病原学检查具有较高的特异性，且操作简便，患者无痛苦。现就最常用的抗酸菌涂片染色、改良罗氏培养、荧光定量PCR三种检测方法进行分析，评价其在尿液结核分枝杆菌检测对肾结核诊断的应用价值 1 材料与方法 1.1 标本来源 2006年11月至2009年10月我院住院的肾结核患者，共计54例。男性29例，女性25例。其中小于20岁者5例，大于40岁者12例，20-40岁者37例，占68.5%；单侧肾结核48例，双侧肾结核6例；合并其他脏器结核病(如肺结核、脊柱结核、肠结核、附睾结核等)39例，约占72.2% 1.2 标本收集 抗酸菌涂片染色检测：留取12小时尿液，静置，倾去上清液，留取沉淀部分30ml，以3,000rpm离心30分钟，弃上清，取沉淀物涂片 改良罗氏培养和荧光定量PCR检测：嘱患者留取晨尿，因晨尿浓缩，适用于做病原学检查。在留取尿液之前先用消毒液清洗外阴，以去除污染菌。分别留取中段尿约20ml-30ml于一次性无菌塑料标本杯中各一杯。为提高检出率，所有患者均连续留取3天标本，置于2℃-8℃冰箱中贮存，于3天后将尿液混合进行改良罗氏培养和荧光定量PCR检测 如患者正在进行抗结核药物治疗时，应停用所有抗结核药一周，以提高结核杆菌的检出率 1.3 试剂与仪器 1.3.1 抗酸菌涂片染色 试剂按照《全国临床检验操作规程》(第三版)(796)标准自行配置。无需特殊仪器 1.3.2 改良罗氏培养 试剂罗氏培养基由珠海贝索生物技术有限公司提供。仪器隔水式培养箱由天津市泰斯特仪器有限公司提供 1.3.3 荧光定量PCR 试剂荧光定量PCR检测试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供。仪器LightCycler3.5全自动荧光定量基因扩增仪由罗氏公司提供 1.4 方法 1.4.1 抗酸菌涂片染色 按照《全国临床检验操作规程》(第三版)(795-796)标准执行操作 1.4.2 改良罗氏培养 将标本进行离心，以每分钟2000rpm离心3分钟为宜，取离心沉淀后的尿沉渣标本0.1ml-0.3ml，以无菌操作接种于培养基斜面上，一般每份标本同时接种2支培养管。将接种好的培养管置于35℃-37℃培养箱中孵育，5%-10%的CO2可以促进分枝杆菌的生长，培养管须松盖倾斜放置24小时后再将盖子锁紧，垂直放置。接种并孵育第3、7天各观察一次菌落生长情况。此后每周观察一次，记录菌落生长及污染情况 1.4.3 荧光定量PCR 取底部尿液标本10ml至1.5ml离心管中15,000rpm离心5分钟。去上清，沉淀加无菌生理盐水1ml打匀，15,000rpm离心5分钟，去上清。加50μlDNA提取液充分混匀，100℃浴温10分钟，待自然冷却后，10,000rpm离心5分钟，取上清液2μl加入专用毛细管中4,000rpm离心3分钟，插入圆形卡盘倒置20秒钟后放入仪器中进行循环扩增。步骤为：93℃→2分钟预变性，然后按照93℃5秒→57℃45秒，做40个循环，最后置37℃延伸1秒。整个过程严格执行无菌操作，扩增及结果判读，由电脑自动完成 2 结果 三种方法检测尿液结核分枝杆菌的阳性检出率分别为抗酸菌涂片染色法25.9%(14/54)，改良罗氏培养法51.9%(28/54)，荧光定量PCR法72.2%(39/54) 3 讨论 近年来临床不典型肾结核发病率有增加的趋势[3]，不典型肾结核的体征性表现为：①中青年患者反复出现无症状性血尿；②无明确原因的顽固性尿频；③反复脓尿而一般抗感染治疗无效；④轻微的腰痛而不伴有膀胱刺激症状，IV