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影响ELISA法检测丙肝抗体出现假阳性因素分析【摘要】目的：探讨酶联免疫吸附法（ELISA）检测丙肝抗体（HCV-Ab）过程中存在假阳性的原因及解决方法。方法：回顾性统计分析了36例用ELISA方法检测的HCV-Ab弱阳性血清标本，再采用聚合酶链反应（PCR）方法定量检测HCV-RNA进行确证试验，确定ELISA方法的假阳性率，并分析影响ELISA方法出现假阳性的因素及其解决方法。结果:ELISA方法检测的HCV-Ab弱阳性血清标本用PCR法检测HCV-RNA复检后28例仍为阳性，8例阴性，表明以PCR检测HCV-RNA方法为准，ELISA法有77.8％的真阳性率，有22.2％的假阳性率。影响因素除了方法学、试剂盒本身之外，还有标本处理、操作不当等多种因素。结论:多种因素可能会导致ELISA法检测丙肝抗体出现假阳性，除了严格操作、做好质控外，对可疑的假阳性的标本一定要认真复测，最好采用PCR检测HCV-RNA进行确证。? 【关键词】酶联免疫吸附法（ELISA）；丙肝抗体（HCV-Ab）；聚合酶链反应（PCR）；假阳性；因素? 【中图分类号】R156.3【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)12-0206-02 丙型肝炎（HepatitisC，简称丙肝）是有丙型肝炎病毒（HCV）引起的危害广大人群肝脏健康的一种传染性疾病，目前临床上把检测患者血清丙肝抗体（HCV-Ab）做为诊断丙肝的主要依据，酶联免疫吸附法（ELISA）因其灵敏度高、特异性强，是进行HCV-Ab的主要检测方法之一[1]，但实验室在应用ELISA法检测丙肝抗体有许多因素可能会导致假阳性的结果[2],为此本文就回顾性统计分析了我院三年间35例用ELISA方法检测的HCV-Ab弱阳性血清标本，再采用聚合酶链反应（PCR）方法将ELISA方法检测的HCV-Ab检测HCV-RNA进行确证试验复检的结果，现报道如下：? 1资料与方法? 1.1一般资料:35例血清标本均来自2008年6月～2011年6月我院肝病科门诊和住院患者 1.2方法? 1.2.1仪器与试剂:HCV-RNA使用美国ABI7500实时荧光定量PCR扩增仪，测定试剂由上海科华生物技术有限公司提供；HCV-Ab使用北京普朗新技术公司酶免仪以及配套洗板机，试剂由上海科华生物技术有限公司提供。? 1.2.2检测方法:抽取患者空腹静脉血3-5ml，离心分离血清后1-2h内先用ELISA方法检测的HCV-Ab，筛查出采用同种方法检测3次仍为弱阳性的血清标本，再用聚合酶链反应法将ELISA方法检测的HCV-Ab检测HCV-RNA加以证实。? 1.2.3质控:所有试剂均在有效期内，全部仪器、设备运行状况良好，每日质控结果、每批测定阴阳对照均在可信范围，HCV-Ab每次参加河南省临检中心质控合格。? 2结果? 三年间36例用ELISA方法检测的HCV-Ab弱阳性血清标本，再采用聚合酶链反应（PCR）方法检测HCV-RNA进行确证试验复检的结果显示28例仍为阳性，8例阴性，表明以PCR检测HCV-RNA方法为准，ELISA法有77.8％的真阳性率，有22.2％的假阳性率。? 3讨论? 目前，确定和临床广泛应用的HCV感染诊断方法有两大类：检测患者血清HCV-Ab和HCV-RNA，虽然最近也发展了丙肝抗原（HCV-Ag）检测技术，但尚未得到广泛应用。对血清（或者血浆）HCV-RNA的检测是目前唯一直接揭示存在的使用方法，但PCR也存在着技术复杂，要求特殊设备、费用高等缺点，难以在基层医院推广应用。血清HCV-Ab的检测主要有胶体金(GICA)和酶联免疫吸附（ELISA）方法，GICA法虽然快捷、方便，但存在灵敏度低，重复性差，不能提供准确的确定界限值的标准品，不能进行质控工作等缺点，仅可以做为初步筛查试验[3]，而ELISA法具有较高灵敏度、特异性强、可进行定量和半定量测定等优点成为检测HCV感染的主要方法。? 导致ELISA法检测血清HCV-Ab出现假阳性的原因多数报道认为[4-7]易受加样、反应温度、反应时间、洗涤彻底性等诸多因素的影响，根据我们工作体会认为以下几个方面是出现假阳性主要因素：标本溶血、被细菌污染、贮存时间过长和标本凝固不全等标本处理问题；试剂盒的抗原不纯、采用多克隆抗体和酶结合物纯度低等试剂盒本身问题；加样时间过长造成加样后放入恒温箱前等待时间过长，加样后孔壁上贴有微小血块加样等问题；洗板针堵塞，抽吸不完全，洗液量不足，洗板次数少等洗板问题。? 总之，影响ELISA法检测血清HCV-Ab出现假阳性因素除了方法学、试剂盒本身之外，还有标本处理、操作不当等多种因素，因此，我们检验人员在工作中应严格按照操作步