腺苷药物预适应对缺血心肌保护作用.doc

腺苷药物预适应对缺血心肌保护作用【摘要】目的：分析腺苷药物预适应对缺血心肌的保护作用及Mn-SOD、ICAM-1?iNOS的含量变化。方法：试验用Wistar大鼠140只，随机分为：对照组?心肌梗塞组?IP组?腺苷PP1个循环组?腺苷PP2个循环组?腺苷PP3个循环组?腺苷PP4个循环组。通过TTC（Triphenyltetrazoliumchloride）染色方法来测定心肌梗塞的面积；通过氧化还原酶法测定血清中的Mn-SOD、ICAM-1?iNOS的含量变化。结果：⑴心肌梗塞面积在心肌梗塞组中最大，IP后心肌梗塞面积有明显的下降，两者之间有明显的统计学差异。在PP三个循环组，心肌梗塞面积达到最小，在PP四个循环组，心肌梗塞面积较PP三个循环组稍有升高，两者之间没有统计学差异（p0.05）。⑵心肌梗塞以后Mn-SOD含量与对照组相比明显升高(p0.05)。⑶心肌梗塞以后血清中的ICAM-1含量表达较对照组有明显的升高，两者之间有统计学差异（p 1．2主要仪器：千分之一天平(METTLER公司)；动物用呼吸机(浙江大学动物仪器厂)；紫外可见分光光度计(上海医用设备厂)；显微镜(OLLIMPUS公司)。? 1．3主要药品：腺苷注射液（沈阳光大药业公司）；TTC试剂（浙江省华东医药股份公司）；伊凡蓝试剂（瑞士Restang公司）；Mn-SOD、ICAM-1、iNOS检测试剂（南京建成生物有限公司）。? 2试验分组? 试验用Wistar大鼠140只，随机分为7组，每组20只：? A组对照组只开胸暴露心脏，不结扎冠状动脉，24小时后取血清和心肌标本供检测用。? B组心肌梗塞组结扎冠状动脉后1小时，关闭胸腔。24小时后取血清和心肌标本供检测用。? C组IP组结扎冠状动脉前降支5分钟，放松3分钟，做三个循环。24小时以后，结扎冠状动脉前降支1小时，取血清和心肌标本供检测用。? D组腺苷PP组? D1组PP1个循环组腺苷PP24小时，结扎冠状动脉1小时。取血清和心肌标本供检测用。? D2组PP2个循环组腺苷PP24小时，再注射相同剂量，做二个循环。24小时以后，结扎冠状动脉前降支1小时，取血清和心肌标本供检测用。? D3组PP3个循环组腺苷PP24小时，再注射相同剂量，做三个循环。24小时以后，结扎冠状动脉前降支1小时，取血清和心肌标本供检测用。? D4组PP4个循环组腺苷PP24小时，再注射相同剂量，做四个循环。24小时以后，结扎冠状动脉前降支1小时，取血清和心肌标本供检测用。? 3动物模型的建立? 3．1建立心肌梗塞动物模型。? 3．2建立IP动物模型。? 3．3建立腺苷PP模型? 4标本的收集和处理? 4．1Mn-SOD暴露下腔静脉，抽取静脉血3ml，4000转?分钟离心5分钟，取血清置于－20℃低温冰箱保存。? 4．2心肌标本试验终点时间，剪下心脏，剪下梗塞部位。? 5试验检测? 5．1心肌梗塞面积的检测：按TTC染色的方式进行。? 5．2Mn-SOD、ICAM-1、iNOS的检测：严格按照说明书操作进行。? 6统计分析? 资料以均数±标准差表示，各试验组之间比较用T检验，组内之间比较用单因素方差分析。P0.05）。? 7．3Mn-SOD的测定结果 心肌梗塞以后血清中的Mn-SOD含量表达较对照组有明显的升高，两者之间有统计学差异（p0.05）? 8讨论? PP对心肌有明显的保护作用，腺苷是机体能量代谢的产物，主要来源于ATP降解。心脏短暂缺血后大量ATP降解，导致局部心肌组织腺苷积聚[2-3]。SOD是体内自由基重要的清除酶之一，有三种不同的类型，分别命名为：Mn-SOD、Cu/Zn-SOD和Fe-SOD。Mn-SOD在IP中发挥了重要的作用，而在IP第一相中产生的Mn-SOD还可能在第二相保护作用中发挥了更大的保护作用[4-6]。Yamashita的研究则指出Mn-SOD蛋白表达的高峰和IP发挥作用的时间相同，并且Mn-SOD的含量和心肌梗塞面积呈负相关。国外学者Yamashita曾经指出Mn-SOD可能是缺血IP的最终效应器[6]。NOS分为两大类，即原生型NOS(constitutiveNOS，cNOS)和诱生型NOS(inducibleNOS，iNOS)。缺血后几分钟内iNOS活性即增加，继之NO浓度升高，随时间的延长iNOS蛋白表达下降；NOS已被选择性地确定为预适应延迟相的调节物。在野生型小鼠，初发预适应后24hiNOS的表达和活性增强。无iNOS等位基因的纯和型小鼠缺乏延迟相预适应的保护作用[7-10]。ICAM-1又称CD54，