蛹虫草白化菌株生物学特性及其子实体成分分析.docVIP

蛹虫草白化菌株生物学特性及其子实体成分分析摘要：对在栽培蛹虫草(Cordyceps miIitaris)B6过程中发现的白化菌株AB6的部分生物学特性和所获得的子实体成分进行研究。结果表明，AB6在光照条件下菌丝不变色，其菌丝最佳生长温度为25℃、pH 4.0～6.0。AB6子实体的粗蛋白、粗纤维、水、灰分、总水解氨基酸和粗多糖等成分含量与B6子实体无显著差别；而其灰分和虫草素含量较高，分别为8.29％和12.9 mg／g，均高于退化的白化菌株DAB6和B6的子实体；其黄酮类、虫草酸和腺苷，分别为0.22％、14.8 mg／g和1.16 mg／g，比B6子实体低 关键词：蛹虫草白化菌株；生物学特性；成分分析；评价指标；资源利用 虫草(cordyceps)因其显著的药用和保健价值而在中国乃至亚洲地区得到长久的应用。随着市场需求的不断增长，蛹虫草(c.militaris)人工栽培产业已日渐强大，这在一定程度上缓解了虫草自然资源紧缺的问题。目前，蛹虫草生产中以橙黄色子实体为主，其它品种鲜有报道。王洪军等首次报道了蛹虫草栽培过程中的白化现象，但并未对变异后的子实体进行研究分析。笔者对蛹虫草白化菌株的部分生物学特性和其子实体的成分进行研究，为其开发利用提供参考依据 1　材料与方法 1.1供试菌株 蛹虫草(C，militaris)B6菌株为出发菌株(封三图1)；蛹虫草白化菌株AB6(封三图2)是栽培B6时发现的白化子实体经分离纯化获得；白化退化菌株DAB6(封三图3)是AB6在扩繁过程中获得的一株子实体变矮、产量明显下降且栽培性状稳定的菌株。供试菌株均由广东省微生物研究所微生物资源中心实验室分离获得，25℃下PDA斜面培养10d，4℃保存 1.2供试子实体 B6和AB6子实体为广东省微生物研究所微生物资源中心实验室人工栽培所得，于60℃下烘干至恒重，粉碎，过20目筛 1.3试剂 HPLC流动相试剂为色谱纯，芦丁为化学对照品(中国药品生物制品检定所提供)，其余试剂均为分析纯 1.4生物学特性研究 1.4.1菌落颜色 分别从PDA斜面上挑取B6、AB6菌块(约0.5cm2)接至PDA平板上，25℃下暗培养8d后，在光照强度为500～800luX(10h／d)的条件下培养，48h后观察菌落颜色的变化，设3个重复 1.4.2温度对茵丝生长速度的影响 将B6、AB6菌块分别接至PDA平板上，方法同1.4.1，培养10d，用直径为0.5cm的打孔器沿菌落边缘打孔，将菌块接种于PDA平板。分别在20、25、28℃下，避光培养12d，设3个重复 1.4.3pH值对菌丝生长速度的影响 将B6、AB6菌块分别接至pH4.0、5.0、6.0、8，0的PDA平板上，方法同1.4.1，25℃下避光培养，设3个重复 1.5成分测定 粗蛋白含量按照GB／T5009.5-2003第一法测定，换算系数为6.25；粗纤维含量按照GB／T5009.10-2003重量法测定；水分含量按照GB／T5009.3-2003进行测定；总灰分含量按照GB／T 5009，1―5009，100-2003进行测定；水解氨基酸含量按照GB／T5009，124―2003进行样品测定；微量元素按照GB／T5009.11-2003处理样品，用IPC-MS法测定；虫草酸、虫草素和腺苷含量按林群英等(2009)进行测定；粗多糖含量按照NY／T 1676-2008进行测定；黄酮类采用硝酸铝比色法进行含量测定 1.6数据分析 试验数据采用SPSSl3，0(SPSS Inc。Chicago，IL)软件进行处理，通过一维方差分析(Analysis of Variance，ANOVA)最小显著差法(Least Significant Difference，LSD，P=0.05)进行统计分析 2　结果与分析 2.1生物学特性研究 2.1.1B6和AB6茵落颜色比较 B6和AB6在暗培养条件下均不产生色素，菌丝基本为白色。在光照条件下培养2d后B6产生黄色色素，整个菌落显黄色(封三图4Ⅲ，Ⅳ)，AB6不产生色素，菌落依然呈白色(封三图4I，Ⅱ) 2.1.2温度对茵丝生长速度的影响 由图5可知，B6最适生长温度为20℃，AB6最适生长温度为25℃。蛹虫草白化菌株的最适生长温度比蛹虫草菌株高5℃ 2.1.3pH值对菌丝生长速度的影响 由图6可知，AB6和B6在pH4.0～6.0之间，菌丝生长速度最快；pH为8.0时，两者的生长速度均降低 2.2子实体成分分析 2.2.1常规成分 AB6的子实体粗蛋白含量为28.0％，粗纤维含量为17.2％，水分含量7.21％