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饮料、果汁中棒曲霉素测定【摘 要】检测果汁中棒曲霉素。方法：采用NY/T1650-2008和NY/T 2008-2007对果汁中的棒曲霉素进行了测定。结果：对20批次的果汁按上述方法进行了测定，均未检出 【关键词】果汁;棒曲霉素;测定;高效液相色谱法 棒曲霉素属于真菌毒素，又称展青霉素。是由几种真菌如展青素（Pcnicillium patulum）或棒曲霉（As-pergillus clavatus）等产生的一种次级代谢产物，主要污染苹果和山楂及其制品。有抗革兰氏阳性、阴性菌活性，展青霉是一种有毒的真菌代谢产物，它是一种神经毒物，主要损害中枢神经系统，且具有肾脏和消化系统毒性，致癌性，致畸，致突变作用和免疫毒性。对蛋白质、核酸组成，酶活性、细胞呼吸和细胞膜传递增多有抑制作用。因此，及时对食品及其原料中的真菌毒素进行检测，防止真茵毒素污染的食品进入食物链，是预防真菌毒素对人和动物带来危害的主要手段。日本曾发生奶牛的展青霉素中毒，出现上行性神经麻痹，中枢神经系统水肿及灶状出血。但动物实验并不一定引起神经系统的损害。本实验室采用NY/T1650-2008和NY/T 2008-2007对果汁中的棒曲霉素进行了测定，试验结果如下： 1.材料与方法 1.1材料 方法中所用试剂，除另有说明外，均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682 规定的一级水 乙腈：色谱级 果胶酶,活性不低于1500TU/g，储存于2-8℃的冰箱中 四氢呋喃溶液；吸取8mL四氢呋喃溶液：吸取8mL 四氢呋喃稀释至1000mL水中， 充分摇匀 棒曲霉素标准液：100mg/L，0-4℃条件下贮存 净化柱：Mycrosep228 Atlapat 柱（内装涂硅胶土、硅胶、硅酸镁载体、无水硫酸钙） 分析天平：感量为0.0001g和0.01g 高效液相色谱仪，配有紫外检测器 氮吹仪 1.2实验方法 展青霉素标准储备液：准确移取1.00mL展青霉素标准溶液（2.4）于10mL容量瓶中，用乙腈（4.1）稀释定容，充分混匀。该溶液每毫升含展青霉素标准物质10.0ug，有效期6 个月 羟甲基糠醛标准储备液：准确称取0.02g 羟甲基糠醛标准物质于50mL 烧杯中，用甲醇溶解并定容至100mL，混匀。该溶液每毫升含羟甲基糠醛标准物质0.2mg。置于0-4℃冰箱中保存。羟甲基糠醛标准工作液：准确吸取1.0mL羟甲基糠醛标准储备液（2.7），用甲醇稀释定容至10mL，混匀。该溶液每毫升含羟甲基糠醛标准物质20.0ug。置于0-4℃冰箱中保存 棒曲霉素混合标准工作液；分别移取1.00mL 展青霉素标准储备液（2.5）和1.00mL 羟甲基糠醛标准工作液（2.8）于离心管中，氮气吹至近干，用四氢呋喃溶液（2.3）转移至10mL 容量瓶中，定容至刻度，每毫升含青霉素标准物质1.00ug、羟甲基糠醛标准物质2.00ug，置于0-4℃冰箱中保存 提取：试样中加入21mL乙腈于漩涡振荡器振荡2min后，静置分层，直接读取上清液体积V1 净化： 移取约8mL提取液于试管中，过Mycrosep 228Atlapat 净化柱，收集净化液，准确移取5mL于10mL 试管中，40℃条件下用氮气吹至近干，加入0.50mL 四氢呋喃溶液，混匀，过滤膜，试液供测定 测定：色谱柱：C18，5ug,250mm×4.6mm（i.d），或性能相当者 流动相：四氢呋喃溶液（4.3） 流速：1.0mL/min 检测波长：276nm 柱温：30℃ 进样量：10ul 准确移取棒曲霉素混合标准工作液和样品待测溶液，分别进样，外标法定量。同时做空白试验 图1 对照品图 图2 样品图 结果计算：试样中棒曲霉素的含量以质量分数ω 计，单位为微克每千克或微克每升（ug/kg ugL）表示，按公式计算： 式中： As-试溶液中展青霉素的峰面积； Astd-标准溶液中展青毒素的峰面积； ρstd-展青霉素标准溶液的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V1-试样提取液的体积，单位为毫升（mL）； V2-收集试样净化液的体积，单位为毫升（mL）, V2＝0.5mL； V3-试样最终定容体积，单位为毫升（mL）,V3＝0.5mL； m-试样质量或体积，单位为克或毫升（g/mL） 2.试验结果 对20 批次的果汁按上述方法进行了测定，均无阳性结果 3.讨论 高效液相法检测方法比较昂贵和耗时，因为检测过程中需要使用大量的有机溶剂、贵重的设备和繁杂的样品净化。且样品不容易处理干净，常常有干扰。检测方法具有高选择性，灵敏、快速、一次可检测多个样品、对样品的纯度